[發(fā)明專利]一種CIK淋巴細(xì)胞的擴(kuò)增激活方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610146820.0
• 申請日: 2016-03-15
• 公開（公告）號: CN105695404B
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐以兵;鄭樹;梁廷波;朱莉莉;胡薇蕾
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 33200 杭州求是專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 邱啟旺

本發(fā)明公開了一種使用轉(zhuǎn)染功能蛋白質(zhì)的宿主細(xì)胞,聯(lián)合多種蛋白質(zhì)擴(kuò)增激活CIK細(xì)胞的方法。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是與現(xiàn)有的方法相比，本發(fā)明擴(kuò)增和激活的CIK細(xì)胞的純度更高、擴(kuò)增效率更高、殺傷腫瘤和腫瘤微環(huán)境中TAMs的能力更強(qiáng)。本發(fā)明在控制和緩解部分疾病的進(jìn)展,如癌癥、傳染性疾病、糖尿病、或器官移植和乙肝方面具有廣闊的前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫學(xué)領(lǐng)域，具體是指使用轉(zhuǎn)染了多種蛋白質(zhì)的宿主細(xì)胞，聯(lián)合多種蛋白共同作用定向擴(kuò)增激活CIK淋巴細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

CIK細(xì)胞治療對多種腫瘤例如：肺癌、頭部和頸部鱗狀細(xì)胞癌、肉瘤癌和急性白血病等腫瘤治療有明顯療效。目前CIK細(xì)胞治療在美國主要用來和手術(shù)、化療和放療聯(lián)合使用解決腫瘤的復(fù)發(fā)問題。CIK細(xì)胞數(shù)量和殺傷功能與療效直接相關(guān)，治療中存在的問題在于獲得高純度的CIK細(xì)胞非常困難。傳統(tǒng)使用的白介素2、IL-1α、IFN-γ,CD3mAb純度低(20％-30％)；擴(kuò)增后的CIK細(xì)胞殺傷功能低下，不能滿足臨床需求。本發(fā)明人之前的發(fā)明采用轉(zhuǎn)染CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163和CD137L蛋白質(zhì)的K562細(xì)胞(以下簡稱宿主細(xì)胞)用于擴(kuò)增NK細(xì)胞。本發(fā)明將宿主細(xì)胞結(jié)合傳統(tǒng)使用的白介素2、IL-1α、IFN-γ,CD3mAb定向擴(kuò)增激活CIK細(xì)胞，解決了CIK數(shù)量和純度的問題，能夠充分滿足臨床治療的需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提出一種更加有效的方法，實(shí)現(xiàn)CIK淋巴細(xì)胞的擴(kuò)增。

本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：一種CIK淋巴細(xì)胞的擴(kuò)增激活方法，使用轉(zhuǎn)染了蛋白質(zhì)A、蛋白質(zhì)B、蛋白質(zhì)C、蛋白質(zhì)D、蛋白質(zhì)E、蛋白質(zhì)F的宿主細(xì)胞，聯(lián)合蛋白質(zhì)A1、蛋白質(zhì)B1、蛋白質(zhì)C1、蛋白質(zhì)D1共同對淋巴細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增激活，得到CIK淋巴細(xì)胞；所述蛋白質(zhì)A包含CD8α的功能片段和白介素21的功能片段；蛋白質(zhì)B包含CD14的功能片段；蛋白質(zhì)C包含CD19的功能片段；蛋白質(zhì)D包含CD86的功能片段；蛋白質(zhì)E包含CD163的功能片段；蛋白質(zhì)F包含CD137L的功能片段；蛋白質(zhì)A1包含白介素2的功能片段、蛋白質(zhì)B1包含IL-1α的功能片段、蛋白質(zhì)C1包含IFN-γ的功能片段、蛋白質(zhì)D1包含CD3mAb的功能片段。

進(jìn)一步地，所述宿主細(xì)胞為K562細(xì)胞。

進(jìn)一步地，所述的蛋白質(zhì)A、蛋白質(zhì)B、蛋白質(zhì)C、蛋白質(zhì)D、蛋白質(zhì)E、蛋白質(zhì)F的劑量均為50pM-1000pM。蛋白質(zhì)A1、蛋白質(zhì)B1、蛋白質(zhì)C1的劑量均為10-1000IU/毫升，蛋白質(zhì)D1的劑量在10-1000納克/毫升；所述宿主細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的用量比例(數(shù)量比)為宿主細(xì)胞：淋巴細(xì)胞＝1-10：1，更優(yōu)選地，為宿主細(xì)胞：淋巴細(xì)胞＝1-4：1，最優(yōu)選地為1∶1。

進(jìn)一步地，所述蛋白質(zhì)A、蛋白質(zhì)B、蛋白質(zhì)C、蛋白質(zhì)D、蛋白質(zhì)E、蛋白質(zhì)F為純化的蛋白質(zhì)或由宿主細(xì)胞在細(xì)胞膜表面即時表達(dá)，蛋白質(zhì)A1、蛋白質(zhì)B1、蛋白質(zhì)C1、蛋白質(zhì)D1為純化的蛋白質(zhì)；所述純化是指質(zhì)量分?jǐn)?shù)在90％以上。

進(jìn)一步地，所述蛋白質(zhì)A、蛋白質(zhì)B、蛋白質(zhì)C、蛋白質(zhì)D、蛋白質(zhì)E、蛋白質(zhì)F分別為CD8α-白介素21復(fù)合物、CD14、CD19、CD86、CD163和CD137L，其中，CD8α為在宿主細(xì)胞膜上表達(dá)的膜蛋白，CD8α連接白介素21后使得白介素21表達(dá)在細(xì)胞膜上，成為跨膜蛋白；CD14、CD19、CD86和CD137L均為膜蛋白。

進(jìn)一步地，所述淋巴細(xì)胞選自外周血淋巴細(xì)胞、臍帶血淋巴細(xì)胞、CIK細(xì)胞中的一種或多種，或者為外周血淋巴細(xì)胞、臍帶血淋巴細(xì)胞、CIK細(xì)胞中的一種或多種和其它淋巴細(xì)胞的組合，或為白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L、白介素2、IL-1α、IFN-γ、CD3mAb中的一種或多種按照任意比組成的混合物作用于人體血管中的血液所產(chǎn)生的淋巴細(xì)胞。

進(jìn)一步地，轉(zhuǎn)染了蛋白質(zhì)A、蛋白質(zhì)B、蛋白質(zhì)C、蛋白質(zhì)D、蛋白質(zhì)E、蛋白質(zhì)F的宿主細(xì)胞通過蛋白穩(wěn)定表達(dá)系統(tǒng)得到。