[發明專利]一種羅倫隱球酵母rho1基因cDNA序列及其編碼的Rho1GTP蛋白

在審

• 申請號: 201610146716.1
• 申請日: 2016-03-15
• 公開（公告）號: CN105779475A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 余挺;張楊揚;林明;鄭曉冬
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/12
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏;侯蘭玉

技術領域

本發明涉及基因工程領域，特別涉及一種羅倫隱球酵母rho1基因cDNA序列及其編碼的Rho1GTP蛋白。

背景技術

在我國果實采后病害引起的損失率約為20％至50％，每年造成的經濟損失高達百億水平。為了減少對于環境污染、提高食品安全，生物防治被視為最有可能取代化學殺菌劑的方法。但在實際農業生產中，生防制劑往往會受到采前和采后不可避免的一種或多種環境脅迫的影響，如溫度脅迫(包括高溫和低溫)、氧化脅迫、滲透壓脅迫和紫外線的影響。羅倫隱球酵母(Cryptococcuslaurentii)是一種球形真菌，被廣泛研究的用于防治果實采后病害的拮抗酵母。但在NCBI上對于羅倫隱球酵母基因序列主要為核糖體RNA,而其全基因組序列尚未公布,因此測定轉錄組序列信息將有助于加快羅倫隱球酵母分子水平上的研究。

酵母細胞壁完整性(Cellwallintegrity,CWI)信號通路是在細胞正常生長過程中或者外界環境迅速改變的條件下為應對細胞壁逆境而產生的應答反應。CWI信號通路是通過細胞表面感受器將逆境信號傳導到Rho1GTP酶，而后控制下游的效應因子做成相應地應答。Rho1GTP酶是CWI信號途徑的主調節因子，不僅能整合來自細胞表面的逆境信號，而且涉及肌動蛋白的重排、細胞完整性的維持、細胞壁的形成等多條重要的代謝途徑。目前，在釀酒酵母中已鑒定出Rhol下游控制的6個效應因子，包括Pkc1蛋白激酶，β-1,3-葡聚糖合成酶(β-1,3-glucansynthase，β-1,6-GS)、β-1,6-葡聚糖合成酶(β-1,6-GS)、2個形成素(formin)蛋白(Bni1和Bnr1)、1個泡外復合體組分(Sec3)和1個轉錄因子Skn7。

釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)作為一種模式生物，也是第一個用于外源基因表達的真核生物，具有安全無毒、能對蛋白質進行加工和修飾、遺傳背景清楚等優點。pYES6/CT是一種酵母附加型載體，含有釀酒酵母2μ質粒復制起點有關的部分序列，作為穿梭載體能夠存在于大腸桿菌和釀酒酵母細胞，并能在釀酒酵母染色體之外復制。啟動子是外源蛋白表達盒中的核心構件。GAL1基因作為強啟動子能夠誘導外源蛋白達到較高水平的表達，轉錄水平可以通過葡萄糖抑制，被半乳糖所誘導。在大腸桿菌中以氨芐青霉素為篩選標記，在釀酒酵母中以殺稻瘟菌素為篩選標記，YEP型載體即使缺乏選擇壓力，質粒丟失的速度大概也只為每代3％。

發明內容

本發明提供一種羅倫隱球酵母rho1基因cDNA序列。

本發明還提供一種所述羅倫隱球酵母rho1基因cDNA序列編碼的Rho1GTP蛋白。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種羅倫隱球酵母rho1基因cDNA序列，cDNA全長597bp，羅倫隱球酵母rho1基因cDNA序列為：

ATGTCCGGCGAAATCAGACGAAAGCTCGTTATCGTTGGTGACGGTGCGTGCGGAAAGACATGTCTTCTCATCGTCTTCAGCAAGGGCATGTTCCCCGAGGTCTACGTCCCCACCGTCTTCGAGAACTACGTTGCCGACGTGGAGGTCGACGGCAAGAAAGTCGAGTTGGCCTTGTGGGATACCGCCGGACAAGAGGATTACGATCGTCTCCGACCTCTGTCTTACCCGGACTCGCACGTCATCCTGATCTGTTTCGCCATTGACTCGCCTGATTCGCTCGATAACGTTCAAGAAAAGTGGATCTCTGAGGTTCTCCACTTCTGCCAAGGACTACCCATCATCCTCGTCGCCTGCAAAAAGGATCTCCGAGACGACCCAAAGACCATCCAAGACCTCGACAGGATGGGCCAGCACCCTGTCCGTCGAGACGAGGGTTTGGCCGTCGCTCAAAAGATCGGCGCGCAGGGATACGTCGAGTGTTCCGCCAAGACCAACGAGGGTGTCAAAGAGGTCTTCCAAACCGCTACCAGGCACGCTTTGCAGAGCAAGAAGTCGGGCCGATCCAAGCGCTCCGGAAAGGGCGGCTGTGTTGTTCTCTAG(SEQIDNO：3)。