[發明專利]一種脂肪間充質干細胞成骨誘導組合物及其成骨誘導方法

有效

• 申請號: 201610143944.3
• 申請日: 2016-03-14
• 公開（公告）號: CN105695399B
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發明（設計）人: 葛嘯虎;陳海佳;王一飛;馬巖巖
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/0775
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

本發明涉及細胞培養技術領域，特別涉及一種脂肪間充質干細胞成骨誘導組合物及其成骨誘導方法。本發明脂肪間充質干細胞成骨誘導組合物包括鈣粘附蛋白?11和富血小板血漿，該脂肪間充質干細胞成骨誘導組合物可顯著提高脂肪間充質干細胞的成骨誘導分化能力，采用PRP代替動物血清，減少了其應用的風險和免疫原性，并且可應用于臨床。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，特別涉及一種脂肪間充質干細胞成骨誘導組合物及其成骨誘導方法。

背景技術

骨缺損指骨的結構完整性被破壞，是臨床常見病。創傷、感染、腫瘤、骨髓炎手術清創、以及各種先天性疾病是導致骨缺損的主要原因。較小的骨缺損(通常指8mm以下)，對于一個健康的非吸煙者來說，有可能自行愈合；但骨缺損過大，或者是在較小的骨頭上的骨缺損，很難完全愈合。這就需要手術的干預，主要方法包括：骨移植、人工骨和組織工程骨。

骨組織工程是指將分離的自體高濃度成骨細胞、骨髓基質干細胞或軟骨細胞，經體外培養擴增后種植于一種天然或人工合成的、具有良好生物相容性、可被人體逐步降解吸收的細胞支架或稱細胞外基質上，這種生物材料支架可為細胞提供生存的三維空間，有利于細胞獲得足夠的營養物質，進行氣體交換，排除廢料，使細胞在預制形態的三維支架上生長，然后將這種細胞雜化材料植入骨缺損部位，在生物材料逐步降解的同時，種植的骨細胞不斷增殖，從而達到修復骨組織缺損的目的。因此足夠量的成骨細胞在骨組織工程中成為關鍵因素。如何通過誘導獲得足夠量的成骨種子細胞，并在誘導過程中維持種子細胞的表型特征成為骨組織工程研究中的熱點。

脂肪組織是人體儲存最大、容易獲取和應用的組織，具有很大的臨床應用前景。脂肪間充質干細胞(ADSCs)是一種成體干細胞，具有向血管內皮細胞、成骨細胞、軟骨細胞等多向分化的潛能。目前，間充質干細胞向成骨細胞的誘導分化是骨組織工程研究中的熱點，誘導的成骨細胞可應用于治療骨頭壞死、骨折后骨延遲愈合等骨科疾病。通常采用分離自體脂肪間充質干細胞在體外擴增并向成骨誘導培養后植入體內。從抽取的脂肪組織中提取的間充質干細胞作為介質在組織工程應用中取得明顯成功。

研究發現，鈣粘附蛋白-11(cadherin-11)能夠誘導間充質細胞向成骨細胞的分化。鈣粘附蛋白-11為鈣粘附蛋白家族成員，參與多種生物學過程，如組織形成、胚胎發育、骨組織形成等。成骨細胞持續表達cadherin-11，在骨和軟骨中優先表達，控制著間充質細胞向成骨細胞和軟骨細胞的分化。但單純采用鈣粘附蛋白-11對間充質干細胞進行誘導時，誘導分化率較弱。因此，對于能夠提高脂肪間充質干細胞向成骨細胞誘導分化能力的技術仍有需求。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種脂肪間充質干細胞成骨誘導組合物及其成骨誘導方法。該脂肪間充質干細胞成骨誘導組合物可顯著提高脂肪間充質干細胞的成骨誘導分化能力。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種脂肪間充質干細胞成骨誘導組合物，包括鈣粘附蛋白-11和富血小板血漿(PRP)。

本發明發現將鈣粘附蛋白-11和富血小板血漿按一定比例聯合使用后，可顯著提高脂肪間充質干細胞向成骨細胞的轉化效率，增強了成骨誘導分化能力。

作為優選，以μg/mL計，鈣粘附蛋白-11與富血小板血漿的比例為(0.1～1)：(0.05～0.1)。

在本發明提供的一些實施例中，以μg/mL計，鈣粘附蛋白-11與富血小板血漿的比例為0.1：0.1。

在本發明提供的另一些實施例中，以μg/mL計，鈣粘附蛋白-11與富血小板血漿的比例為0.5：0.08。

在本發明提供的另一些實施例中，以μg/mL計，鈣粘附蛋白-11與富血小板血漿的比例為1：0.05。

作為優選，該脂肪間充質干細胞成骨誘導組合物還包括基礎培養基。