[發明專利]一種漢遜酵母特異性表達載體的構建及在提高乙肝病毒表面抗原在漢遜酵母表達量的方法

有效

• 申請號: 201610137206.8
• 申請日: 2016-03-11
• 公開（公告）號: CN105755035B
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 黃恩啟;吳常偉;李超;王力衛;劉術敏;程英杰;陶立峰;楊世龍
• 申請（專利權）人: 安徽智飛龍科馬生物制藥有限公司;重慶智飛生物制品股份有限公司;北京智飛綠竹生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N15/51;C12R1/78
• 代理公司: 安徽知問律師事務所 34134
• 代理人: 代群群

本發明公開一種漢遜酵母特異性表達載體的構建及在提高乙肝病毒表面抗原在漢遜酵母表達量的方法，屬于生物工程技術領域，構建：步驟1，從真核漢遜酵母菌株ATCC34438或其衍生菌種基因組DNA，設計特異性引物，PCR擴增，分別調取MOX基因啟動子MOXp和終止子MOX?TT；步驟2，將畢赤酵母表達載體pPICZC上的啟動子AOX1和終止子AOX?TT，分別替換成MOX基因啟動子MOXp和終止子MOX?TT，即得漢遜酵母表達載體pHPZF1.0。采用本發明所述方法，可以獲得的乙型肝炎表面抗原漢遜酵母酵母工程菌株能夠以甲醇誘導型方式穩定和高效地表達HBsAg重組蛋白，適用于規?；aHBsAg重組蛋白。

技術領域

本發明涉及一種漢遜酵母特異性表達載體的構建及在提高乙肝病毒表面抗原在漢遜酵母表達量的方法，屬于生物工程技術領域。

背景技術

乙型肝炎(簡稱乙肝)疫苗已大規模使用愈20年，但乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)感染仍是最為嚴重的全球性健康問題之一。據世界衛生組織報道，全世界約20億人有現狀或既往乙肝病毒感染標志，每年約有60萬人死于HBV感染引起的肝衰竭、肝硬化和肝細胞癌。我國乙肝病毒攜帶者超過1億，現有患者超過2000萬，南方流行重于北方，農村重于城市。目前并無特異性治療乙肝的藥物，最有效的手段就是接種乙肝疫苗。

第一代乙肝疫苗為血源疫苗，采用無癥狀帶毒者(HBsAg陽性)血漿為原料制備。由于提取方法不同，所得成分也有差別，但均含提純的22nm小顆粒乙型肝炎表面抗原。80年代以來開始研制第二代乙肝疫苗，系將S基因編碼的226個氨基酸產物裝配而成的抗原顆粒，采用基因工程方法在哺乳動物細胞和重組酵母中均能表達。重組乙型肝炎疫苗(漢遜酵母)乙肝疫苗是最新一代基因工程乙肝疫苗，是繼血源疫苗、釀酒酵母疫苗之后的第三代疫苗，系國家863重大科技攻關成果，已有2000萬名受種者驗證了其安全性。對HBsAg陽性母親所生新生兒，本市已將母嬰阻斷率較高的重組(漢遜酵母)乙肝疫苗納入免疫規劃，在出生12小時內給予免費接種；在本地的臨床觀察中，健康成人全程接種后1個月，97.46％的受種者抗體陽轉；全程接種后半年，59.8％的受種者抗體水平在1000mIU/mL以上，因而保護期更長。按照世界衛生組織資料，不同乙肝疫苗的相對效力不以HBsAg含量來判斷，10ug重組(漢遜酵母)疫苗適用于任意年齡的易感人群，能提供全面高效持久的免疫保護屏障。免疫預防為主，有效遏制乙肝的高流行狀態，基因重組(漢遜酵母)技術為乙型肝炎的免疫預防提供了一種全新的選擇。