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[發(fā)明專利]一種鏈霉菌中聚酮生物合成基因簇及其擴增引物與試劑盒有效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 201610127506.8 申請日: 2016-03-07
公開(公告)號: CN105602950B 公開(公告)日: 2017-07-21
發(fā)明(設計)人: 葛蓓孛;張克誠;劉艷;劉彥彥;楊振娟;檀貝貝 申請(專利權(quán))人: 中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所
主分類號: C12N15/11 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C12N15/52;C12N9/00;C12Q1/68
代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245 代理人: 關(guān)暢,白艷
地址: 100193 *** 國省代碼: 北京;11
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 霉菌 中聚酮 生物 合成 基因 及其 擴增 引物 試劑盒
【說明書】:

技術(shù)領(lǐng)域

發(fā)明涉及微生物基因工程領(lǐng)域,具體涉及一種鏈霉菌中聚酮生物合成基因簇及其擴增引物與試劑盒。

背景技術(shù)

鏈霉菌是一類來源于土壤的革蘭氏陽性細菌,它可以產(chǎn)生豐富的次級代謝產(chǎn)物,可廣泛應用于人、畜及農(nóng)業(yè)抗生素、抗真菌劑等方面,對人類具有重要的應用價值。作為一類重要的工業(yè)微生物,關(guān)于它的研究越來越受到重視。隨著鏈霉菌基因工程技術(shù)的發(fā)展,克隆次級代謝產(chǎn)物生物合成基因、鑒定合成基因的功能,并有目的地定向改造基因、在基因水平改變菌種的生產(chǎn)能力日益成為研究的熱點。由于鏈霉菌次級代謝產(chǎn)物生物合成基因的重要作用,所以從不同的鏈霉菌菌株中進行生物合成基因的克隆具有重要的實際意義。鏈霉菌次級代謝產(chǎn)物生物合成基因通常是成簇排列的,包含很多相關(guān)功能基因,這些基因?qū)股禺a(chǎn)量具有很大影響。

鏈霉菌次級代謝過程中,部分存在聚酮類化合物生物合成基因簇,是以羧酸縮合反應形式進行的。如紅霉素(Streptomyces erytheara)和制霉菌素(Streptomyces noursei)產(chǎn)生菌中均含有聚酮類化合物生物合成基因簇。武夷菌素是由不吸水鏈霉菌武夷變種(Streptomyces ahygroscopicus var.wuyiensis)產(chǎn)生的一種生物農(nóng)藥,具有高效、廣譜、低毒的特點,在生態(tài)農(nóng)業(yè)和綠色食品生產(chǎn)中得到了廣泛的應用。武夷菌素的生產(chǎn)是利用培養(yǎng)不吸水鏈霉菌武夷變種,通過生物深層發(fā)酵產(chǎn)生的微生物的次生代謝產(chǎn)物。研究武夷菌素的合成基因,對于基因工程育種提供了重要的理論基礎(chǔ),對于提高新菌株的開發(fā)與創(chuàng)制水平具有重要的作用。但是,由于鏈霉菌本身GC含量很高,容易形成發(fā)夾結(jié)構(gòu),多基因的克隆難度較大。因此,篩選高效、特異、靈敏的特異性引物對于基因簇的克隆是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是提供一種用于擴增聚酮生物合成基因簇的成套引物。

本發(fā)明提供的成套引物,由引物對1-引物對44組成;

所述引物對1由序列1所示的引物和序列2所示的引物組成;

所述引物對2由序列3所示的引物和序列4所示的引物組成;

所述引物對3由序列5所示的引物和序列6所示的引物組成;

所述引物對4由序列7所示的引物和序列8所示的引物組成;

所述引物對5由序列9所示的引物和序列10所示的引物組成;

所述引物對6由序列11所示的引物和序列12所示的引物組成;

所述引物對7由序列13所示的引物和序列14所示的引物組成;

所述引物對8由序列15所示的引物和序列16所示的引物組成;

所述引物對9由序列17所示的引物和序列18所示的引物組成;

所述引物對10由序列19所示的引物和序列20所示的引物組成;

所述引物對11由序列21所示的引物和序列22所示的引物組成;

所述引物對12由序列23所示的引物和序列24所示的引物組成;

所述引物對13由序列25所示的引物和序列26所示的引物組成;

所述引物對14由序列27所示的引物和序列28所示的引物組成;

所述引物對15由序列29所示的引物和序列30所示的引物組成;

所述引物對16由序列31所示的引物和序列32所示的引物組成;

所述引物對17由序列33所示的引物和序列34所示的引物組成;

所述引物對18由序列35所示的引物和序列36所示的引物組成;

所述引物對19由序列37所示的引物和序列38所示的引物組成;

所述引物對20由序列39所示的引物和序列40所示的引物組成;

所述引物對21由序列41所示的引物和序列42所示的引物組成;

所述引物對22由序列44所示的引物和序列44所示的引物組成;

所述引物對23由序列45所示的引物和序列46所示的引物組成;

所述引物對24由序列47所示的引物和序列48所示的引物組成;

所述引物對25由序列49所示的引物和序列50所示的引物組成;

所述引物對26由序列51所示的引物和序列52所示的引物組成;

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