[發明專利]一種高得率的灰樹花多糖酶提方法

在審

• 申請號: 201610122681.8
• 申請日: 2016-03-04
• 公開（公告）號: CN105754005A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 毛日文;朱惠芬;仲延龍
• 申請（專利權）人: 江蘇江大源生態生物科技股份有限公司
• 主分類號: C08B37/02
• 分類號: C08B37/02
• 代理公司: 上海海頌知識產權代理事務所(普通合伙) 31258
• 代理人: 陳麗君

技術領域

本發明涉及一種高得率的灰樹花多糖酶提方法，屬于生物工程技術領域。

背景技術

灰樹花俗稱栗蘑，是食、藥兼用蕈菌，夏秋間常野生于栗樹周圍。子實體肉質，柄短呈珊瑚狀分枝，重疊成叢，其外觀，婀娜多姿、層疊似菊，其氣味、清香四溢，沁人心脾，其肉質脆嫩爽口，百吃不厭，其營養具有很好的保健作用和很高的藥用價值，尤其是所含灰樹花多糖，以β-葡聚糖為主，其中抗癌活性最強，帶6條支鏈的β-(1，3)-葡聚糖占相當大的比重，具有較強的抗癌能力。

現有技術中灰樹花多糖的提取方法有堿提法、酸提法、鹽提法和熱水浸提法等，但在烯酸、稀堿下易使多糖發生糖苷鍵斷裂，部分多糖水解而減少多糖提取，增加產品中的雜質含量，同時存在試劑用量大，生產周期長的問題，從而增加加工成本，降低生產效率和商業價值。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的缺陷，提供一種高得率的灰樹花多糖酶提方法，采用多種酶分步酶解的方法提取灰樹花多糖，以提高灰樹花多糖得率，可減少糖苷鍵斷裂，降低工藝難度和生產成本，提高生產效率。

本發明是通過如下的技術方案予以實現的：

一種高得率的灰樹花多糖酶提方法，其方法如下：

（1）預處理：將灰樹花清洗干凈，置于50~70℃下烘干，烘干后投入粉碎機粉碎，隨后過20~60目篩網制得灰樹花粉末；

（2）配液：將灰樹花粉末投入蒸餾水中，所述灰樹花粉末的重量與蒸餾水的體積比為1:（15~20）（g/ml），控制攪拌速率為80~120r/min攪拌20~30min，制得浸提原液；

（3）一次酶解：在浸提原液中加入緩沖液，將浸提原液的PH調至4.00~4.50，隨后投入反應釜中，在反應釜中加入纖維素酶，控制反應釜溫度為32~38℃，攪拌速率為60~80r/min，進行一次酶解反應1~2h；

（4）一次酶滅活：將一次酶解反應結束后的溶液升高溫度至60~80℃，并保持8~10min，進行一次酶滅活，隨后冷卻至室溫制得一次浸提液；

（5）二次酶解：在一次浸提液中加入稀酸，將一次浸提液PH調至2.50~3.00，隨后投入反應釜中，在反應釜中加入果膠酶，控制反應釜溫度為40~55℃，攪拌速率為50~70r/min，進行二次酶解反應2~3h；

（6）二次酶滅活：將二次酶解反應結束后的溶液升高溫度至100~110℃，并保持5~7min，進行二次酶滅活，隨后冷卻至室溫制得二次浸提液；

（7）三次酶解：在二次浸提液中加入稀堿，將二次浸提液的PH調至3.50~4.00，隨后投入反應釜中，在反應釜中加入菠蘿蛋白酶，控制反應釜溫度為50~60℃，攪拌速率為90~100r/min，進行三次酶解反應1~2h；

（8）三次酶滅活：將三次酶解反應結束后的溶液升高溫度至110~120℃，并保持8~10min，進行三次酶滅活，隨后冷卻至室溫制得三次浸提液；

（9）減壓濃縮：將三次浸提液控制壓力為0.1MPa，溫度為60~70℃，進行減壓濃縮，濃縮至200℃熱測比重為1.130~1.185，得濃縮物；

（10）過濾：將濃縮物通過膜過濾，取上層固體；

（11）真空干燥：將上層固體在真空度為-0.1MP，干燥溫度為30~40℃下干燥20~30min，制得灰樹花多糖。

上述一種高得率的灰樹花多糖酶提方法，其中，所述緩沖液由濃度為0.2mol/L的磷酸氫二鈉和濃度為0.1mol/L的檸檬酸，按體積比8:11混合均勻，配制而成。

上述一種高得率的灰樹花多糖酶提方法，其中，所述纖維素酶為纖維素酶xm90a，所述纖維素酶xm90a購自于湖州禮來生物技術有限公司，所述纖維素酶的添加質量占浸提原液質量的1~2%。

上述一種高得率的灰樹花多糖酶提方法，其中，所述稀酸為稀鹽酸或稀檸檬酸中的一種。

上述一種高得率的灰樹花多糖酶提方法，其中，所述果膠酶為果膠酶Y23，所述果膠酶Y23購自于上海如吉生物科技發展有限公司，所述果膠酶的添加質量占一次浸提液的1~2%。

上述一種高得率的灰樹花多糖酶提方法，其中，所述稀堿為稀氫氧化鈉或稀碳酸氫鈉中的一種。

上述一種高得率的灰樹花多糖酶提方法，其中，所述菠蘿蛋白酶為食品級菠蘿蛋白酶，所述食品級菠蘿蛋白酶購自于南寧龐博生物工程有限公司，所述菠蘿蛋白酶的添加質量占二次浸提液的0.5~1.5%。

本發明的有益效果為：