[發明專利]一種制備腸道粘膜損傷動物模型的方法及其用途

在審

• 申請號: 201610116025.7
• 申請日: 2016-03-01
• 公開（公告）號: CN107137388A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發明（設計）人: 劉杰;潘亦達;張會祿;張駿
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院
• 主分類號: A61K31/198
• 分類號: A61K31/198;A61K49/00;A01K67/027
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙)31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明涉及醫療評價、檢測技術領域，具體涉及一種制備腸道粘膜損傷動物模型的方法及其用途。

背景技術

資料顯示，炎癥性腸病(Inflammatory Bowel Diseases，IBD)是一種病因不明的慢性腸道疾病，包括潰瘍性結腸炎(Ulcerative Colitis，UC)和克羅恩病(Crohn’s Diseases，CD)兩種。研究顯示，IBD好發于青壯年，往往是發作一緩解一復發的模式，嚴重影響病人的生活質量；其中UC主要發生在直腸和結腸，而CD的病變多見于末端回腸和鄰近結腸。所述炎癥性腸病的主要表現為腹瀉、腹痛、體重下降及腹部包塊等，其中UC常伴有膿血便，同時也是結腸癌的高危因素；而CD常有瘺管形成和腸梗阻。IBD在西方國家相當常見，患病率達100-200/10萬，在我國基于多家醫院病例統計推測，UC與CD的患病率分別為11.6/10萬和1.4/10萬，而近幾年患病率呈逐年增加之勢，由于疾病遷延不愈，給患者帶來沉重的經濟和心理負擔，目前UC已成為嚴重危害國人健康的常見病、多發病。

炎癥性腸病的發病機制不明，目前認為IBD是由環境、遺傳、感染、代謝及免疫等多因素相互作用所致，氧化損傷可能是主要機制之一，在病理生理上IBD體現為粘膜損傷與粘膜修復的失代償。目前用于研究IBD的常用動物模型主要分為兩類：化學物質誘導模型如DSS、TNBS、乙酸和OXZ等；基因工程型動物模型如基因敲除或轉基因動物模型。實踐顯示，前者誘導方式相對簡便，但是造模的成功率與藥物的實驗濃度、培養環境以及實驗動物的種屬差異有關；后者造模成本較高，造模時間較長。然而目前化學誘導劑中主要是誘導炎癥產生，但尚沒有從代謝角度或粘膜干細胞損傷修復角度探討腸道粘膜損傷的產生和腸道炎癥發生的理想模型。

基于現有技術的現狀，本申請的發明人擬提供一種制備腸道粘膜損傷動物模 型的方法，通過建立合適的動物模型模仿炎癥性腸病，用于研究炎癥性腸病的病理發生和發展進程，幫助理解與炎癥性腸病有關的病因學因素，建立臨床上的診斷指標，為炎癥性腸病的治療提供實驗依據，本發明將對治療炎癥性腸病藥物的篩選具有重大意義。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術存在的不足，提供一種制備腸道粘膜損傷動物模型的方法以及制得用于研究炎癥性腸病的動物模型，尤其從代謝損傷角度提供一種新型的L-MSO誘導的腸道粘膜損傷動物模型。本發明建立的新的簡便穩定的代謝型腸道粘膜損傷的誘導動物模型對炎癥性腸病的研究和實踐具有重大價值。

本發明的進一步的目的是提供制得的動物模型在用于L-MSO在誘導小鼠腸道粘膜損傷中的應用，通過建立合適的動物模型模仿炎癥性腸病。

本發明基于：谷氨酰胺(glutamine，Gln)是一種具有多種生物學作用的條件必需氨基酸，主要應用于改善機體的各種應激反應，維持機體免疫細胞正常功能；Gln已在臨床實踐中用于腸炎治療，但其治療機制尚不明確，目前認為Gln可減輕創傷、感染等多種應激反應對腸黏膜屏障功能的損傷，以及動物及臨床實驗研究顯示腸內、腸外營養中適當地補充外源性Gln能加快腸黏膜上皮細胞的更新，增強腸黏膜細胞間的緊密連接，防止炎癥所致的腸道通透性增加，進而起到恢復腸黏膜形態和功能完整性的作用，表明Gln通過維持結腸粘膜形態及屏障功能的完整、提高機體的抗氧化能力、緩解炎癥反應對潰瘍性結腸炎所致的結腸損傷起到修復作用，從而使潰瘍性結腸炎造成的結腸粘膜損傷得到緩解等的研究基礎；通過采用L-蛋氨酸砜亞胺(L-Methionine sulfoximine，L-MSO)誘導小鼠腸道粘膜損傷，建立合適的動物模型模仿炎癥性腸病。

具體的，本發明提供了一種制備腸道粘膜損傷動物模型的方法，采用藥物L-蛋氨酸砜亞胺L-MSO從代謝損傷角度誘導制備腸道粘膜損傷動物模型，其包括步驟：

1)使用SPF級C56BL/6的6-8周齡小鼠為實驗動物，設L-MSO高濃度組和L-MSO低濃度組；

2)L-MSO高濃度組誘導腸道嚴重的持續性損傷，工作濃度為100mg/kg，每 隔一天灌胃給藥，給藥持續一周；

3)L-MSO低濃度組誘導腸道輕中度的損傷，工作濃度為25mg/kg，每隔一天灌胃給藥，給藥持續一周；

4)實驗期間，每天觀察小鼠的應激、活動減少的大體情況，并按所規定的指標觀察，同時進行疾病活動度(DAI)評分；

表1 DAI評分標準

5)動物腸道評價及組織樣本收集；

6)HE染色和組織病理學評分；

7)EILISA