[發明專利]反映男性精子活力的精漿piRNA標志物或其組合及應用

在審

• 申請號: 201610114615.6
• 申請日: 2016-03-01
• 公開（公告）號: CN105525029A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 瞿飛;陳熹;洪葉挺
• 申請（專利權）人: 蘇州派安生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

1.一種與男性精子活力相關的piRNA標志物或其組合，其特征在于包括 下列piRNA中的任意一種或多種：DQ570956、DQ571813、DQ575659和DQ575661； 其中，所述的男性精子活力選自弱精癥；DQ570956核苷酸序列如SEQIDNO. 1所示，DQ571813核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，DQ575659核苷酸序列如 SEQIDNO.3所示，DQ575661核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。

2.權利要求1所述的與男性精子活力相關的piRNA標志物或其組合在制 備檢測男性精子活力的試劑中的應用。

3.權利要求1所述的與男性精子活力相關的piRNA標志物或其組合在制 備弱精癥診斷試劑中的應用。

4.定量檢測權利要求1所述的與男性精子活力相關的piRNA標志物或其 組合的試劑在制備檢測男性精子活力的試劑中的應用；所述的定量檢測權利 要求1所述的與男性精子活力相關的piRNA標志物或其組合的試劑優選權利 要求1所述的與男性精子活力相關的piRNA標志物或其組合的TaqMan探針和 引物。

5.定量檢測權利要求1所述的與男性精子活力相關的piRNA標志物或其 組合的試劑在制備弱精癥診斷試劑中的應用；所述的定量檢測權利要求1所 述的與男性精子活力相關的piRNA標志物或其組合的試劑優選權利要求1所 述的與男性精子活力相關的piRNA標志物或其組合的TaqMan探針和引物。

6.一種用于檢測男性精子活力的試劑盒，其特征在于包含TaqMan探針 實時熒光定量PCR法檢測DQ570956、DQ571813、DQ575659和DQ575661的探 針和引物。

7.一種用于診斷男性弱精癥的試劑盒，其特征在于包含TaqMan探針實 時熒光定量PCR法檢測DQ570956、DQ571813、DQ575659和DQ575661的探針 和引物。

8.一種預測弱精癥的方法，其特征在于包含以下步驟：

(1)收集精漿樣本，包括精子活力正常的有生育能力的男性以及精子活 力弱的生殖功能障礙的男性的精漿樣本，并提取總RNA；

(2)逆轉錄成cDNA，采用TaqMan探針實時熒光定量PCR法對DQ570956、 DQ571813、DQ575659和DQ575661四種piRNA進行檢測，測算出精子活力低下 患者與正常生育男性精漿中四種piRNA的絕對含量；

(3)經數學分析過程計算RiskScore從而評估精子活力與piRNA表達 水平之間的關系，使用的公式如下：

RiskScore_i＝∑ⁿ_j＝1W_j·S_ij

在以上公式中，每個piRNA的“s”是以正常對照組5％的下限為參考值， 即低于正常5％下限記為1，否則為0。“s_ij”是piRNAj相對于samplei獲得 的數值，“W_j”是piRNAj的加權值。通過以上公式，即可以給病人i打分，獲 得其危險系數評分RiskScore_i。然后根據ROC曲線找到一個合適的Cut-off 值，然后將計算得到的RiskScore_i分值與Cut-off值比較，分值大于Cut-off 值提示該樣本危險系數高，精子活力不足，該樣本來源的男子患有弱精癥； 分值小于Cut-off值提示該樣本危險系數低，精子活力正常，該樣本來源的 男子未患弱精癥。從而使用危險系數評分法，將建立男性不育與piRNA表達 水平之間的聯系，評估男性精子活力，評估受測試樣本的危險性，進而特異 性檢測或預測弱精癥男性生殖功能障礙疾病。