[發明專利]抗乙型肝炎病毒的免疫反應性細胞

在審

• 申請號: 201610113446.4
• 申請日: 2016-02-29
• 公開（公告）號: CN107129537A
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發明（設計）人: 王歈
• 申請（專利權）人: 北京賽諾泰生物科技有限公司;株式會社法羅斯疫苗
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P31/20;A61P1/16;A61P35/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 劉成春,王朋飛

技術領域

本發明涉及一種特異性地識別感染了乙型肝炎病毒的細胞的嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)，表達其的免疫反應性細胞及利用其來調節或治療源自乙型肝炎病毒的肝疾病的方法。

背景技術

乙型肝炎是全世界范圍內主要的問題性疾病。據世界衛生組織(WHO，World Health Organization)的統計結果表明，約有20億人感染有乙型肝炎，其中，推定約有2億4千萬人患有慢性肝炎。肝細胞癌在世界范圍的癌癥死亡原因中排第三位，每年有600,000名以上的患者因源自乙型肝炎病毒的慢性肝疾病(肝硬化或肝癌)而死亡。

基礎的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染會誘發肝硬化或肝細胞癌(HCC，hepatocellular carcinoma)。與其它癌癥相比，肝細胞癌的預后差，其原因在于，肝癌細胞在早期通過血管大范圍地擴散，并具有可加快生長速度的腫瘤生物學特性。另外，由于大部分肝細胞癌會伴有慢性肝炎或肝硬化，因此成為積極治療癌癥方面的阻礙。

在乙型肝炎患者居多的亞洲或非洲，肝癌患者中有約70～80％的乙型肝炎病毒攜帶者。據臺灣的一個報道，乙型肝炎病毒攜帶者發生肝細胞癌的風險度與非攜帶者相比，約高出200倍。尤其是在病毒增殖速度快的情況下，即血清HBVe抗原或HBV-DNA為陽性時，他們中年齡較高或患有肝硬化的人更易患上肝癌。

用于治療源自HBV的慢性肝疾病的藥物有干擾素-α(interferon-α；IFN-α)、聚乙二醇干擾素(PEG-IFN)、核苷類似物(拉米夫定、恩替卡韋及替比夫定)及核苷酸類似物(阿德福韋及替諾福韋)等。優選的藥物為，能夠完全去除乙型肝炎病毒，并能夠實現從乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)陽性到抗表面抗原陽性的血清轉化(seroconversion)的 藥物，然而，上述藥物沒有顯示出這種效果。

IFN-α為長期使用的抗HBV藥物，但已知其具有嚴重的副作用，并且在治療效果方面有限。對乙型肝炎病毒表面抗原的去除率約在8％以下。核苷類似物及核苷酸類似物等藥物雖然能夠抑制病毒的逆轉錄酶(viralreverse transcriptase)，但不能去除乙型肝炎病毒共價閉合環狀DNA(HBV cccDNA)。這些藥物雖然能抑制HBV的復制，但由于HBV cccDNA一直存在于宿主細胞的核中，且HBV DNA會插入到宿主細胞的染色體內，因此無法實現患者對HBV免疫環境的調節或去除病毒。而且，在患者中斷治療的情況下，HBV的復制會退回到治療前的狀態，從而使肝炎癥狀大大惡化。雖然需要使用這種藥物持續進行治療，但是難以期待大的效果，而且患者可能需要面對這種持續治療所帶來的變異病毒所導致的耐藥性等嚴重的副作用。

由于肝細胞癌在早期沒有癥狀，因此，大部分患者為在進展到一定程度后才被發現，在這種情況下，目前還沒有有效的治療方法，對于早期診斷的肝細胞癌，首選的治療方法為肝移植或肝切除術，但在患者中能夠進行肝切除術的比例僅為30-40％。作為其它治療方法，雖然可以使用肝移植、全身性化療、放射治療、射頻消蝕治療方法等，但是復發率高，且在移植后排斥反應等副作用較嚴重。目前為止，作為酪氨酸激酶抑制劑的索拉非尼是能夠治療已進行的肝細胞癌的唯一藥物，但是生存延長期僅為3個月左右。更主要的問題是在實施了現有的治療術之后會引起肝細胞癌的復發或向肝細胞以外的器官轉移。上述問題是由插入有未完全被去除的HBV的肝細胞所導致的。因此，需要開發出一種用于治療源自HBV的肝細胞癌的新型治療方法。

免疫治療方法可以增強存在于體內的現有的免疫反應，或對新型病毒或癌細胞誘導特異性免疫反應，從而能夠有效且選擇性地對病毒感染細胞或肝細胞癌進行標記。即，可以通過非特異性宿主的免疫反應或HBV特異性輔助性T細胞(T-helper)或細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic T limphocytes，CTL)的活性化來去除病毒或肝細胞癌。

目前最受矚目的治療途徑為，將經過基因操作(genetically modified)的HBV特異性T細胞進行過繼轉移(adoptive transfer)的方法。T細胞的過繼轉移是通過對新型病毒或癌細胞誘導特異性免疫反應，從而可以恢復喪失的抗HBV的免疫功能。