[發明專利]蔬菜中8種喹諾酮類藥物殘留的高效液相色譜-串聯質譜檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 201610112412.3
• 申請日: 2016-02-29
• 公開（公告）號: CN105758957A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 王曉利;趙汝松;苑金鵬;王珊珊;陳相峰;陳躍;寧凡盛;李磊;趙金
• 申請（專利權）人: 山東省分析測試中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 趙妍

技術領域

本發明屬于化學分析領域，具體涉及一種蔬菜中8種喹諾酮類藥物殘留的高效液相色譜-串聯質譜檢測方法及其應用。

背景技術

喹諾酮類抗生素被大量應用于人類醫療及動物養殖中，而抗生素使用后80％左右以藥物原形或代謝產物隨糞尿排除體外。人用抗生素在污水處理過程中去除率較低，造成水體抗生素污染；畜牧養殖中抗生素的使用一方面直接造成動物源性食品中藥物殘留，另一方面隨糞尿排出的抗生素在環境中累積，導致水體和土壤的污染；同時富含抗生素的畜禽糞便作為有機肥時大多未經處理直接用于農業生產，殘留抗生素可能被農作物吸收蓄積最終通過食物鏈威脅人體健康。已有研究顯示喹諾酮類抗生素可被蔬菜等植物所吸收累積，但對蔬菜等植物性食品中抗生素的污染問題現在研究相對較少，由于蔬菜樣品的基質相對復雜，含有大量的有機酸、糖類、脂類和色素等，這些物質嚴重干擾蔬菜中的抗生素的檢測。

發明內容

本發明為了解決現有技術中存在的技術問題，提供一種蔬菜中8種喹諾酮類藥物殘留的高效液相色譜-串聯質譜檢測方法及其應用。該方法操作簡便、靈敏度高、結果準確可靠，為蔬菜中喹諾酮類抗生素污染特征分析及蔬菜等植物性食品的質量安全監測提供了技術支持。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

蔬菜中8種喹諾酮類藥物殘留的高效液相色譜-串聯質譜檢測方法，包括如下步驟：稱取勻漿后蔬菜樣品，在蔬菜樣品中加入內標溶液，然后在蔬菜樣品中加入酸化乙腈提取，提取完畢加入氯化鈉振蕩后離心，將上清液用硫酸鎂除水和PSA(乙二胺基-N-丙基)吸附凈化后，將上清液用氮氣吹干，然后用甲醇-水復溶，過濾后利用高效液相色譜-串聯質譜法進行檢測。

加入氯化鈉提取有鹽析作用，可以促進水層與有機相的分層，使蔬菜中的藥物有機物更好地溶解在有機相中，提高提取效率。加入硫酸鎂有助于去除提取液中多余水分，改善喹諾酮類化合物的分配；PSA可去除蔬菜樣品中的有機酸、糖類、脂類和色素等干擾性基質物質，提高檢測的準確度。凈化后的提取液經氮氣吹干后用甲醇-水復溶濃縮后，用于高效液相色譜-串聯質譜法檢測。該預處理步驟，可以最大限度地將喹諾酮類藥物從蔬菜樣品中提取出來，并且有效除去喹諾酮類藥物中的干擾物質，使得該方法可以準確檢測蔬菜中的多種喹諾酮類藥物。

優選的，所述8種喹諾酮類藥物為二氟沙星、達氟沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、恩諾沙星、培氟沙星、環丙沙星和諾氟沙星。

由于蔬菜樣品的基質相對復雜，含有大量的有機酸、糖類、脂類和色素等，這些物質嚴重干擾了蔬菜中抗生素的檢測，導致這幾種物質的同時檢測較為困難，同時受到現有的提取方法的限制，蔬菜中的這幾種物質的檢測不準確，本發明的提取方法可以精確提取蔬菜中的這幾種抗生素，并且可以保證較低的檢出限和較好的回收率，檢出限為1μg/kg，在10，50和100μg/kg3個濃度水平下進行加標回收實驗平均回收率為71.5％～111％，相對標準偏差為1.25％～10.2％。

優選的，所述內標溶液為環丙沙星-D8內標溶液，內標溶液的濃度為1.0μg/mL。

優選的，所述酸化乙腈中的含3％甲酸。

優選的，所述蔬菜樣品、酸化乙腈和氯化鈉的用量比例為0.5-1.5g：4.5-5.5ml：1.5-2.5g。

優選的，所述硫酸鎂和PSA的質量比為4-7：0.5-1.5。可以確保樣品中干擾性基質和水分的去除。優選的，所述甲醇-水中，甲醇和水的體積比為3-10：94-97。

優選的，質譜檢測的條件為：離子源：API-ES；毛細管電壓：3000V；霧化壓力：30psi；干燥氣溫度：300℃；干燥氣流量：10L/min；離子極性：正；質量掃描模式：MRM模式。

優選的，目標組分MRM模式下質譜分析參數如下：

優選的，高效液相色譜檢測的色譜條件為：色譜柱：C182.1×150mm，5μm；流速：0.3mL/min；柱溫：30℃；進樣量：5μL；流動相A：水(0.1％甲酸)，流動相B：乙腈，梯度洗脫程序：0-3min10-20％B，3-6min20-90％B，6.1-10min10％B。

上述高效液相色譜-串聯質譜檢測方法在同時檢測蔬菜中8種喹諾酮類藥物殘留中的應用。

本發明的有益效果為：

該方法操作簡便快速、靈敏度高、專屬性強，可實現蔬菜樣品中8種喹諾酮類藥物殘留的高通量分析，滿足蔬菜中喹諾酮類藥物殘留的監控要求。