[發明專利]高效液相色譜法檢測卷煙煙氣所含角鯊烯的樣品液凈化處理方法

在審

• 申請號: 201610109947.5
• 申請日: 2016-02-29
• 公開（公告）號: CN105699532A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 韋建玉;王全;盧健;金亞波;胡亞杰;張紀利;孫建生;萬樹青;陳澤鵬
• 申請（專利權）人: 廣西中煙工業有限責任公司;華南農業大學;中國煙草總公司廣東省公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

技術領域

本發明涉及卷煙煙氣中成分的檢測技術領域，更具體地，涉及一種高效液相色譜 法檢測卷煙煙氣所含角鯊烯的樣品液凈化處理方法。

背景技術

角鯊烯最初是從鯊魚的肝油中發現的，1914年被命名為Squalene,其化學名稱為 2,6,10,15,19,23--六甲基--2,6,10,14,18,22--二十四碳六烯，屬開鏈三萜類化合物。

角鯊烯具有提高人體內超氧化物歧化酶(SOD)活性、增強機體抗氧化性和免疫能 力、改善性功能、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤等多種生理功能，是一種無毒性的具有防病治病作 用的生物活性物質。最近研究發現角鯊烯對人體還具有解毒作用，可移除組織中的脂溶性 毒素。已有研究表明：在煙絲中添加一定量的角鯊烯，可降低煙氣中幾種有害物質和自由基 含量，表明角鯊烯具有獨特降害作用，目前開發利用角鯊烯已成為科技界和煙草業研究的 熱點。

2014年4月，國家煙草專賣局下發關于加快卷煙降焦減害技術成果推廣應用的通 知(國煙辦綜[2014]218號)，提出要加大卷煙減害技術重大專項研究成果的應用推廣力度， 要采取針對性技術措施加快卷煙降焦減害步伐。為了配合國家局加快卷煙降焦減害步伐的 重大決策，本申請人在完成中國煙草總公司2013年度科技面上項目《廣西主流煙氣天然抗 氧化劑角鯊烯的生態累積與減害研究》(中煙辦[2013]149號)研究基礎上，迫切需要建立一 種可行的適于標準的主流煙氣角鯊烯含量的檢測方法。

但是，目前國內外還沒有可參考的煙氣中尤其是主流煙氣中角鯊烯定性和定量的 檢測方法，因此，在煙草行業建立烤煙中角鯊烯定性和定量的檢測方法具有前瞻性，也是十 分必要的。而在煙氣中角鯊烯的檢測中，良好的樣品前處理方法對獲得準確科學的檢測結 果起到關鍵性作用。在確定的檢測條件下，采用不同提取劑提取樣品中角鯊烯，其提取效 率、提取操作用時等因素都是必須考慮的重要因素，各個因素之間又是相互影響的關系，目 前未見基于高效液相色譜法檢測煙葉中角鯊烯的樣品前處理研究報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是填補現有煙氣中角鯊烯的檢測技術不足，尤其是適于 高效液相色譜法檢測煙氣中角鯊烯的樣品前處理方法的不足，提供一種高效液相色譜法檢 測卷煙煙氣所含角鯊烯的樣品液凈化處理方法。

本發明的技術方案通過以下技術方案予以實現：

提供一種高效液相色譜法檢測卷煙煙氣所含角鯊烯的樣品液凈化處理方法，包括 以下步驟：

S11.收集煙氣固粒相物并提取：抽吸卷煙，采用濾片收集煙氣固粒相物；

S12.提?。簩⑹占藷煔夤塘Ｏ辔飫驗V片放入錐形瓶中，加入提取劑，常溫下振 蕩提取，得提取液；

S13.凈化：取步驟S12所得提取液，經過再處理后得到的溶液再經過柱，氯仿洗脫， 收集洗脫液，旋轉蒸發至干，用色譜乙腈定容，過0.22μm濾膜即得待測樣品液；

其中，步驟S12所述提取劑為氯仿；

步驟S13所述再處理指的是將步驟S12所得提取液旋轉蒸發至干，用正己烷溶解， 再用正己烷洗滌；

步驟S13所述過柱是采用硅膠固相萃取柱。

優選地，步驟S11所述抽吸卷煙是按照GB/T16450標準操作。步驟S11所述濾片為 Φ92mm的劍橋濾片。

優選地，步驟S12所述振蕩提取是用搖床以130轉/min振蕩20min。

優選地，步驟S13所述洗滌的次數為3次。

優選地，步驟S13所述硅膠固相萃取柱的裝柱方法為稱取0.5g硅膠，用適量氯仿溶 解后裝柱，硅膠上方加1.0g無水硫酸鈉。

基于所述樣品前處理方法，本發明同時提供一種高效液相色譜法檢測主流煙氣中 所含角鯊烯的方法，以甲醇和乙腈為流動相，采用填有粒徑5μm的高效固定相的柱色譜分離 技術，精確吸取10μL待測樣品液注入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于 210nm波長處檢測角鯊烯的吸收值，采用外標法，根據吸收峰面積計算其含量。

所述高效液相色譜法檢測主流煙氣中所含角鯊烯的方法包括以下步驟：

S1.樣品經前處理得到樣品液；

S2.配制標準溶液，建立標準曲線；

S3.檢測：取樣品液液注入高效液相色譜儀檢測；

S4.采用外標法，根據吸收峰面積計算角鯊烯含量。

所述檢測的檢測條件為：