[發明專利]DC誘導活化劑及其應用

有效

• 申請號: 201610109164.7
• 申請日: 2016-02-28
• 公開（公告）號: CN105647866A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 曾憲卓;魯菲
• 申請（專利權）人: 深圳愛生再生醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0784
• 分類號: C12N5/0784
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及組織工程領域，特別涉及一種DC誘導活化劑及其應用。

背景技術

細胞免疫治療是一種新興的、具有顯著療效的全新的抗腫瘤治療方法， 彌補了傳統的手術、放療、化療的弊端，已經被公認為二十一世紀腫瘤綜合 治療模式中最活躍、最有發展前途的一種治療手段,也是世界目前唯一有希望 完全消滅腫瘤細胞的治療手段。

細胞免疫治療療法是采集人體自身免疫細胞，經過體外培養，使其數量 成千倍增多，靶向性殺傷功能增強，然后再回輸到人體來殺滅血液及組織中 的病原體、癌細胞、突變的細胞，打破免疫耐受，激活和增強機體的免疫能 力，兼顧治療和保健的雙重功效。目前在臨床中使用最多的細胞免疫治療療 法主要是DC治療、CIK治療和DC-CIK聯合免疫治療。

DC是目前發現的功能最強大的抗原提呈細胞(antigenpresenting cell,APC)。近年來，以樹突狀細胞(dendriticcell,DC)為基礎的腫瘤免疫治療 及DC疫苗已取得較大進展，體外制備的DC疫苗顯示出明顯誘發抗腫瘤免 疫應答的能力，具有良好的臨床應用前景。目前，從外周血單個核細胞(PBMC) 經GM-CSF、IL-4體外誘導培養DC的方法已基本得到公認，但DC體外 促成熟的方案尚沒有統一的標準，國內主要采用TNF-a因子，但該方法活化 的DC成熟度低下，不能分泌促炎因子IL-12，致使培養得到的DC功能缺 陷，很大程度上限制了DC疫苗的臨床應用工作的開展。因此，有必要對現 有DC細胞培養方案進行進一步完善，以有效提高DC疫苗在誘導抗炎或抗 腫瘤免疫應答中的作用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，針對現有技術培養出的樹突狀細胞體外 誘導成熟率低，細胞增殖率低，且抗原提呈性能差等缺陷，提供一種能夠提 高樹突狀細胞成熟率及抗原提呈性能的DC誘導劑及其在誘導DC成熟過程中 的應用。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：提供一種DC誘導活化劑， 包括rhTNF-α和，沒食子酸或核桃青皮提取物。

在本發明提供的DC誘導活化劑中，所述rhTNF-α的濃度為800～1200U /ml和，沒食子酸的濃度為5～15μg/ml或所述核桃青皮提取物的濃度為 10～30μg/ml。

在本發明提供的DC誘導活化劑中，所述rhTNF-α的濃度為1000U/ml 和、沒食子酸的濃度為10μg/ml或所述核桃青皮提取物的濃度為20μg/ml。

在本發明提供的DC誘導活化劑中，所述rhTNF-α的濃度為800U/ml 和、沒食子酸的濃度為5μg/ml或所述核桃青皮提取物的濃度為10μg/ml。

在本發明提供的DC誘導活化劑中，所述rhTNF-α的濃度為1200U/ml 和、沒食子酸的濃度為15μg/ml或所述核桃青皮提取物的濃度為30μg/ml。 本發明進一步提供上述的DC誘導劑在誘導DC成熟過程中的應用。

實施本發明提供的DC誘導活化劑及其應用，可以達到以下有益效果：與 現有樹突狀細胞誘導活化劑相比，本發明提供的DC誘導活化劑，能夠促進提 高樹突狀細胞的細胞活性，提高樹突狀細胞的增值率及成熟率，進而提高樹 突狀細胞的抗原提呈性。

具體實施方式

本發明提供的DC誘導活化劑，包括rhTNF-α(Recombinanthumantumor necrosisfactor-α，重組人腫瘤壞死因子α)和沒食子酸；其中，沒食子酸可 由核桃青皮提取物來代替。

進一步地，rhTNF-α能夠刺激樹突狀細胞成熟，以提高樹突狀細胞抗原 提呈能力；優選地，rhTNF-α的濃度為800～1200U/ml。而核桃青皮提取物 的主要成份包括沒食子酸、甲醇、石油醚、氯仿、正丁醇等，核桃青皮提取 物和沒食子酸對金黃色葡萄球菌等細菌均具有強抗菌作用，并且對真菌也有 明顯抑制作用；另外，還能夠清除自由基，具有較強的抗氧化活性，以提高 樹突狀細胞的細胞活性，促進其成熟和正常的生長增殖。優選地，沒食子酸 的濃度為10μg/ml，或核桃青皮提取物的濃度為10～30μg/ml。

本發明提供的DC誘導活化劑，應用于DC成熟過程的方法，包括以下步 驟：

S1、獲取樹突狀細胞前體單個核細胞；

S2、采用第一誘導劑將樹突狀前體細胞當個核細胞誘導分化成未成熟樹 突狀細胞；