[發明專利]一種大苞水竹葉的組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201610108545.3
• 申請日: 2016-02-29
• 公開（公告）號: CN105660413B
• 公開（公告）日: 2017-09-26
• 發明（設計）人: 張占江;李翠;趙以民;繆劍華;韋瑩;韋坤華;李林軒;王一諾;肖冬
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧明智專利商標代理有限責任公司45106
• 代理人: 黎明天

技術領域

本發明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種大苞水竹葉組織培養快速繁殖方法。

背景技術

大苞水竹葉,為鴨趾草科植物大苞水竹葉（Euphorbia pekinensis Rupr.），多年生常綠草本。根圓柱狀，長20-30厘米。花期5-8月，果期6-9月。廣布于全國（除臺灣、云南、西藏和新疆），北方尤為普遍。生于山坡、灌叢、路旁、荒地、草叢、林緣和疏林內。根入藥，具有較高的藥用價值，約 100元/公斤，具有逐水通便，消腫散結，主治水腫，并有通經之效，用于治療慢性腎炎，治療晚期血吸蟲病腹水或其他肝硬變腹水等癥。近年來其資源遭到了嚴重破壞，且對生長環境要求苛刻，隨著市場需求量的不斷增加，野生大苞水竹葉資源瀕臨枯竭了，生產上難以實現大面積栽培。采用生物技術組織培養技術，可以有效快速地提高大苞水竹葉種苗的繁殖速度和質量，實現大苞水竹葉優質種苗的工廠化育苗，以滿足生產上的需要。

發明內容

本發明的目的是提供一種大苞水竹葉組織培養快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優良大苞水竹葉種苗。

本發明通過以下技術方案達到上述目的：一種大苞水竹葉組織培養快速繁殖方法，包括以下步驟：

（1）外植體的選擇與消毒：取大苞水竹葉頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5~10min、線狀自來水沖洗5~15min、75% 乙醇中表面消毒30~45 s、添加了2-3滴吐溫-20的0.1% Hgcl₂消毒8~10min、無菌水沖洗3~5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水；

（2）頂芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養：將步驟（1）得到的外植體接種到MS培養基中，在培養溫度為23~26℃，光照強度1400~2000lux，光照時間為10~12小時/天的條件下培養30天，頂芽分化后獲得叢生芽，其中MS培養基中含0.1~0.4mg/L的KT、1.0~2.0mg/L的6-BA、1.0~2.0mg/L的NAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8；

（3）叢生芽壯苗培養：將步驟（2）中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養基中，在培養溫度23~26℃，光照強度1400~2000lux，光照時間為10~12小時/天的條件下培養40天得到健壯植株，其中MS壯苗培養基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8；

（4）健壯植株生根培養：將步驟（3）中得到的健壯植株置于MS生根培養基中，在培養溫度23~26℃，光照強度1400~2000lux，光照時間為10~12小時/天的條件下培養40天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0 mg/L的IBA、25~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8。

采用本發明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內提供大量大苞水竹葉的優質種苗，有效解決了大苞水竹葉的規模化育苗問題。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明的技術方案進一步說明。

一種大苞水竹葉組織培養快速繁殖方法，包括以下步驟：

（1）外植體的選擇與消毒：取大苞水竹葉頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5~10min、線狀自來水沖洗5~15min、75% 乙醇中表面消毒30~ 45 s、0.1% HgCl₂（添加了2~3滴吐溫-20）消毒8~10min、無菌水沖洗3~5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水；

（2）頂芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養：將步驟（1）得到的外植體接種到MS培養基中，在培養溫度為23~26℃，光照強度1400~2000lux，光照時間為10~12小時/天的條件下培養30天，頂芽分化后獲得叢生芽，其中MS培養基中含0.1~0.4mg/L的KT、1.0~2.0mg/L的6-BA、1.0~2.0mg/L的NAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，觀察發現，培養基中6-BA和NAA濃度增加，大苞水竹葉叢生芽數均增加；結果，在培養基中添加0.2mg/L的KT、2.0mg/L的6-BA和1.5mg/L的NAA叢生芽效果最好。

表1 不同激素對大苞水竹葉組織培養快速繁殖效果的影響