[發(fā)明專利]基于AllGlo探針的VKORC1基因多態(tài)性檢測分型試劑盒及其分型方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610083703.4
• 申請日: 2016-02-06
• 公開（公告）號: CN105483280A
• 公開（公告）日: 2016-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方宜臻;葉輝銘;張忠英
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院;張忠英
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

1.基于AllGlo探針的VKORC1基因多態(tài)性檢測分型試劑盒，其特征在于包括實時熒光 定量PCR試劑、陽性對照及陰性對照；

所述VKORC1(1173C>T)為美國國家生物技術(shù)信息中心所提供人16號染色體VKORC1 基因中的SNP位點。

2.如權(quán)利要求1所述基于AllGlo探針的VKORC1基因多態(tài)性檢測分型試劑盒，其特征 在于所述實時熒光定量PCR試劑包括以下組份：10×Taq緩沖液、10mmol的MgCl₂、5u/μL 的TaqHotstartDNA聚合酶、10mmoldNTPs混合液、50×LowROX、100mL無核酶水、 10μmol/LVKORC1(1173C>T)的特異正向引物、10μmol/LVKORC1(1173C>T)的特異 反向引物和AllGlo探針；所述10×Taq緩沖液包括100mmolTris-HCl和500mmolKCl。

3.如權(quán)利要求1所述基于AllGlo探針的VKORC1基因多態(tài)性檢測分型試劑盒，其特征 在于所述VKORC1(1173C>T)的特異正向引物的核苷酸序列為：

SEQIDNO.1：5＇-AAAGGTGATTTCCAAGAAGCCA-3＇；

所述VKORC1(1173C>T)的特異反向引物的核苷酸序列為：

SEQIDNO.2：5＇-CAGTGACATGGAATCCTGACGT-3＇。

4.如權(quán)利要求1所述基于AllGlo探針的VKORC1基因多態(tài)性檢測分型試劑盒，其特征在 于所述AllGlo探針為VKORC1(1173C>T)的特異探針，其核苷酸序列為：

SEQIDNO.3：VKORC1(1173C>T)-A:MAR-AGTCCAAGAGTCGATG-MAR；

SEQIDNO.4：VKORC1(1173C>T)-G:JUP-AGTCCAAGGGTCGAT-JUP。

5.如權(quán)利要求1所述基于AllGlo探針的VKORC1基因多態(tài)性檢測分型試劑盒，其特征 在于所述陽性對照包括：陽性純合對照品1、陽性純合對照品2、陽性雜合對照品；所述陽性 純合對照品1為VKORC1(1173C>T)分型為AA的DNA樣品，所述陽性純合對照品2為 VKORC1(1173C>T)分型為GG的DNA樣品，所述陽性雜合對照品為VKORC1(1173C>T) 分型AG為的DNA樣品。

6.如權(quán)利要求1所述基于AllGlo探針的VKORC1基因多態(tài)性檢測分型試劑盒，其特征 在于所述陰性對照為1mL的無核酶水。

7.基于AllGlo探針的VKORC1基因多態(tài)性檢測分型方法，其特征在于其步驟如下：

1)采用常規(guī)方法提取EDTA抗凝全血樣本中的DNA；

2)采用如權(quán)利要求1～6中任一所述基于AllGlo探針的VKORC1基因多態(tài)性檢測分型試 劑盒提供的實時熒光定量PCR試劑將DNA進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增；

3)根據(jù)檢測到的熒光信號對人VKORC1基因的單核苷酸多態(tài)性位點VKORC1(1173C> T)進(jìn)行分型。

8.如權(quán)利要求1所述基于AllGlo探針的VKORC1基因多態(tài)性檢測分型試劑盒，其特征 在于所述AllGlo探針采用美國A1leLogicBiosciencesCorporation公司的熒光定量探針。