[發(fā)明專利]以CA19-9 cDNA片段為模板制備RNA探針的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610083165.9
• 申請日: 2016-02-05
• 公開（公告）號: CN105567845B
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發(fā)明（設計）人: 徐學明;魯隼;馮俊清
• 申請（專利權）人: 廣州復能基因有限公司
• 主分類號: C12Q1/6811
• 分類號: C12Q1/6811;C12Q1/6886;C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張瑩

1.一種以CA19-9 cDNA為模板一步反應制備RNA探針的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A.針對CA19-9 mRNA序列篩選多個靶序列，對于每個靶序列設計至少一對引物，所述引物的PCR擴增產物為多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列，每個引物末端添加RNA聚合酶結合序列；

B.從CA19-9 cDNA質粒中，采用步驟A的所述引物，通過PCR擴增得到所述多重DNA片段，純化后混合，作為模板；

C.加入RNA聚合酶和帶有生物素標記的UTP進行反應，將UTP摻入產物，純化后得到100-500nt理想長度的RNA探針，

所述步驟A中，所述篩選包括：篩選2-50個無內含子和重復序列的特定目標序列區(qū)域，根據(jù)需要可選擇同源區(qū)域序列，作為靶序列，

所述靶序列為2個，所述引物如下：

CA19-9-1F：TCACAGCCTCACTTCTAACCTTCT

CA19-9-1R：ccgGAATTCTAATACGACTCACTATAGACGGTTGCCATCCACTCTTTCAC

CA19-9-2F：GCTCCTGCTCACAGCCTCACTTC

CA19-9-2R：ccgGAATTCTAATACGACTCACTATAGTTTGACGGTTGCCATCCACTCTT。

2.根據(jù)權利要求1所述的以CA19-9 cDNA為模板制備RNA探針的方法，其特征在于，所述RNA聚合酶是T7 RNA聚合酶，引物的5′端加上T7啟動子序列。

3.根據(jù)權利要求1所述的以CA19-9 cDNA為模板制備RNA探針的方法，其特征在于，所述RNA聚合酶是SP6 RNA聚合酶，引物的5′端分別加上SP6啟動子序列。

4.根據(jù)權利要求1所述的以CA19-9 cDNA為模板制備RNA探針的方法，其特征在于，所述RNA聚合酶是T3 RNA聚合酶，引物的5′端分別加上T3啟動子序列。

5.根據(jù)權利要求1所述的以CA19-9 cDNA為模板制備RNA探針的方法，其特征在于，所述RNA聚合酶是Trc RNA聚合酶，引物的5′端分別加上Trc啟動子序列。

6.一種快速檢測胰腺癌相關的CA19-9表達的試劑盒，其特征在于：包括根據(jù)權利要求1所述的方法所制備的RNA探針。