[發明專利]蛋白AqpSS9作為水通道蛋白的應用及利用無細胞蛋白合成體系合成并純化活性蛋白AqpSS9的方法

在審

• 申請號: 201610082207.7
• 申請日: 2016-02-05
• 公開（公告）號: CN105624183A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 徐志南;杭寶建;黃磊;蔡謹
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;B01D71/74;B01D69/02
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 劉曉春

1.蛋白AqpSS9作為水通道蛋白的應用，蛋白AqpSS9的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述作為水通道蛋白的應用為用于制備仿生膜。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于所獲得的水通道蛋白制備仿生膜具有透水性，當仿生膜的水通道蛋白AqpSS9與磷脂的質量比為0時水通量為0.4L·m^-2·h^-1，當仿生膜的水通道蛋白AqpSS9與磷脂的質量比提高到1/200時水通量上升到2.2L·m^-2·h^-1，當仿生膜的水通道蛋白AqpSS9與磷脂的質量比提高到1/50時水通量上升到2.7L·m^-2·h^-1。所述磷脂由75%的1,2-二油酰基磷脂酰膽堿和25%的（2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺構成。

4.如權利要求1所述的應用，其特征在于編碼所述氨基酸序列的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。

5.如權利要求1所述的應用，其特征在于，蛋白AqpSS9具有透水的功能，空脂質體的水通透因子P_f值為89.3±1.8μm/s，嵌有AqpSS9的脂蛋白體的P_f值為310.7±3.2μm/s，AqpSS9的單體水通透因子P_f,mono為1.24×10^-20m³/s。

6.含權利要求4核苷酸序列的一種表達載體pIVEX-2.4c-AqpSS9，所述表達質粒pIVEX-2.4c-AqpSS9是利用PCR擴增出AqpSS9基因并克隆到pIVEX-2.4c質粒上構建的。

7.一種利用無細胞蛋白合成體系合成并純化活性蛋白AqpSS9的方法，其特征在于，其無細胞蛋白合成體系具有如下特征，在無細胞蛋白的合成體系中添加去污劑Brij-78至0.7%，并加入權利要求6所述表達載體pIVEX-2.4c-AqpSS9至10μg/ml，37^oC，400rpm反應4h后可溶性的AqpSS9的產量達到565mg/L。