[發明專利]人參稀有皂苷C-K、F1及四種異構體人參皂苷元的制備方法

有效

• 申請號: 201610081555.2
• 申請日: 2016-02-05
• 公開（公告）號: CN105648021B
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 魚紅閃;劉春瑩;金鳳燮
• 申請（專利權）人: 金鳳燮
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20;C12P33/00
• 代理公司: 大連非凡專利事務所 21220
• 代理人: 閃紅霞

1.一種人參稀有皂苷C-K或F1的制備方法，其特征在于按照如下步驟進行：

a. 以人參為原料，分離提取人參二醇類皂苷混合物、人參三醇類皂苷混合物；

b. 分別以人參二醇類皂苷混合物或人參三醇類皂苷混合物為原料，與有機溶劑及緩沖液配制成底物溶液，再將底物溶液與曲霉菌微生物發酵得到的粗酶液反應；

c. 分別提取反應液中皂苷，得到人參稀有皂苷C-K或人參稀有皂苷F1；

所述底物溶液中緩沖液的pH為4.5～6.0，濃度為0.01～0.05M，有機溶劑的質量濃度為5～40%，人參二醇類皂苷混合物或人參三醇類皂苷混合物的質量濃度為0.5～8%；所述緩沖液為醋酸緩沖液、檸檬酸緩沖液或磷酸緩沖液，所述有機溶劑為丙醇、丙酮、乙醇或甲醇。

2.根據權利要求1所述人參稀有皂苷C-K或F1的制備方法，其特征在于所述粗酶液是采用黑曲霉菌或者米曲霉菌液態發酵或者固態發酵，酶發酵培養基的產酶誘導物是人參粉、人參總皂苷或槐花粉；對發酵酶液或者固態發酵酶提取液離心除渣，收集酶蛋白沉淀，將酶蛋白沉淀溶解于緩沖液中即可。

3.根據權利要求2所述人參稀有皂苷C-K或F1的制備方法，其特征在于所述底物溶液與粗酶液反應是將底物溶液與粗酶液混合，在35～60℃反應16～48小時；所述底物溶液與粗酶液的體積比為1：0.1~1。

4.根據權利要求1、2或3所述人參稀有皂苷C-K或F1的制備方法，其特征在于所述c步驟提取反應液中皂苷如下：加入反應液2～4倍體積的有機溶劑沉淀酶蛋白，得上清液，經脫色大孔樹脂柱脫色、減壓濃縮及回收有機溶劑得濃縮液，再將所得濃縮液經大孔樹脂柱反復吸附皂苷，用5～8倍柱體積的去離子水洗脫雜質，再用4～6倍柱體積的質量濃度為80～96%的有機溶劑洗脫皂苷，濃縮、結晶及干燥，得到人參稀有皂苷C-K或人參稀有皂苷F1。

5.一種人參二醇皂苷元的四種異構體或人參三醇皂苷元的四種異構體的制備方法，其特征在于將權利要求1所得到的人參稀有皂苷C-K或人參稀有皂苷F1與從人參根中提取的人參自身皂苷酶復合物反應，在60～85℃反應1.5～10小時，分別提取反應液中皂苷元，得到由 20(S)-人參二醇皂苷元、20(R)-人參二醇皂苷元、其20-羥基脫水的20(21),24-二烯人參二醇皂苷元和20(22),24-二烯人參二醇皂苷元的四種異構體組成的人參二醇皂苷元；或者得到20(S)-人參三醇皂苷元、20(R)-人參三醇皂苷元、其20-羥基脫水的20(21),24-二烯人參三醇皂苷元和20(22),24-二烯人參三醇皂苷元的四種異構體組成的人參三醇皂苷元；

所述人參自身皂苷酶復合物按如下方法制備：在所述a步驟提取人參二醇類皂苷混合物和人參三醇類皂苷混合物后的人參渣中，加入人參渣干重的5～6倍水，在55～75℃攪拌2～3小時，離心收集上清，在65℃以下高真空濃縮至波美度20～25，即為人參自身皂苷酶復合物。

6.根據權利要求5所述的人參二醇皂苷元的四種異構體或人參三醇皂苷元的四種異構體的制備方法，其特征在于所述人參稀有皂苷C-K或人參稀有皂苷F1與從人參根中提取的人參自身皂苷酶復合物的質量比是1：0.1～10，所述反應體系中加有反應體積0.1～50%的甲酸、乙酸或檸檬酸，人參 稀有皂苷C-K或人參稀有皂苷F1反應質量濃度0.1～10%。