[發(fā)明專(zhuān)利]一種人胎盤(pán)部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610080657.2
• 申請(qǐng)日: 2016-02-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107034190B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 康玉;劉齊雨;李可;盧沖;蒲萄;張明星;劉海鷗;羅建民;李桂玲;徐叢劍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院;復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/09
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/09;C12R1/91
• 代理公司: 上海元一成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種人胎盤(pán)部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系，其特征在于，所述的細(xì)胞系為人胎盤(pán)部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系，命名為PSTT-1，于2015年6月30日由中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心（CGMCC）保藏，保藏號(hào)為NO.10882。

2.按權(quán)利要求1所述的人胎盤(pán)部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系，其特征在于，所述的細(xì)胞系具有以下生物學(xué)特征：

單層貼壁生長(zhǎng)，失去接觸抑制，形態(tài)不均一，呈多突起的星形或紡錘形扁平狀結(jié)構(gòu)；體外培養(yǎng)生長(zhǎng)良好，每5天傳代一次，能夠連續(xù)穩(wěn)定傳代30余代；染色體核型分析結(jié)果為正常女性核型：46，XX；PSTT-1與腫瘤組織STR分析結(jié)果高度相似，PSTT-1免疫細(xì)胞化學(xué)染色與腫瘤組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果一致。

3.按權(quán)利要求1所述的人胎盤(pán)部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系，其特征在于，所述的細(xì)胞系通過(guò)下述方法制備，采用離體的腫瘤組織經(jīng)處理后傳代培養(yǎng)，建成人胎盤(pán)部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系PSTT-1，包括以下步驟：

（1）取材：獲得離體的新鮮的胎盤(pán)部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤切除標(biāo)本，病灶組織浸入無(wú)菌Hanks溶液清洗，并去除結(jié)締組織和壞死組織；

（2）原代培養(yǎng)：將腫瘤組織塊接種于T25培養(yǎng)瓶瓶壁，靜置培養(yǎng)，約3周后細(xì)胞從組織塊長(zhǎng)出；

（3）細(xì)胞純化 ：接種約7周后傳第1代，用0.25%胰蛋白酶消化，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中，于倒置相差顯微鏡下觀察，見(jiàn)部分細(xì)胞貼壁，將細(xì)胞懸液倒入另一培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)；按上述方法，重復(fù)3次傳代，使腫瘤細(xì)胞與成纖維細(xì)胞完全分開(kāi)；

（4）傳代培養(yǎng)：當(dāng)細(xì)胞布滿瓶底時(shí)，吸除培養(yǎng)液，PBS緩沖液漂洗，0.25%胰蛋白酶消化，按1:3的比例傳代30余代；

（5）生物學(xué)特性鑒定，獲得人胎盤(pán)部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系PSTT-1，保藏號(hào)為NO.10882。

4.按權(quán)利要求3所述的人胎盤(pán)部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系，其特征在于，所述制備方法中，采用體外培養(yǎng)條件為：含10%FBS、1%丙酮酸鈉、1%L-谷氨酰胺、1%HEPES、1%雙抗的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為37℃，氣體環(huán)境為5%CO₂/95%空氣，濕度為飽和濕度。

5.權(quán)利要求1所述的人胎盤(pán)部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系在用于制備胎盤(pán)部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤疾病的病因?qū)W、轉(zhuǎn)移機(jī)制、耐藥機(jī)理及臨床干預(yù)研究模型中的用途。