[發明專利]經血保存液及其應用、經血源宮內膜干細胞的分離培養方法

有效

• 申請號: 201610077467.5
• 申請日: 2016-02-03
• 公開（公告）號: CN105532647B
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 陳海佳;王一飛;葛嘯虎;馬巖巖;王小燕
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C12N5/074
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

本發明涉及生物技術領域，特別涉及經血源宮內膜干細胞的來源——經血保存液及其應用、經血源宮內膜干細胞的分離培養方法。利用女性經血作為干細胞采集來源，廢物利用，變廢為寶，來源豐富；月經血中富含宮內膜干細胞的數量為骨髓的30倍有效成分含量豐富；采用經血保存液進行保存，避免經血在采集到分離的過程中受外界污染。本發明采用獨特配方的經血保存液對經血進行保存，顯著降低了經血的污染率，同時保證了獲得的經血源宮內膜干細胞的純度和活力。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及經血保存液及其應用、經血源宮內膜干細胞的分離培養方法。

背景技術

子宮是一個具有高度再生及分化能力的組織，每個月經周期，女性的子宮內膜可以從0.5mm左右增長到5～7mm左右，一個女性一生可以經歷400次這樣的循環。研究表明，子宮內膜中含有干細胞，具有高度的分化潛能，增殖能力以及較低的免疫源性。但是其直接獲得途徑，包括子宮切除術、早期妊娠脫膜、刮除術均對供者具有嚴重侵入性。

近年來，日本科學家在女性經血中發現了具有多向分化潛能的干細胞，該干細胞可用于修復受損的心肌組織。2008年，美國科學家Patel等發現，從健康女性經血中可分離出來間充質干細胞，這些細胞具有多向分化能力，并將該細胞命名為經血源子宮內膜干細胞(menstrual blood-derived mesenchymal stem cells，MenSCs)。MenSCs屬于成體干細胞的一種，具有來源豐富、有效成分含量豐富、收集過程無創、增殖和分化潛能巨大、無倫理爭論及廢物回收利用等優點。同時，研究表明，宮內膜干細胞可以用于治療卵巢早衰、子宮內膜疾病、預防衰老等功能，有望成為較為理想的種子細胞。

目前，對于宮內膜干細胞的分離培養，多采用直接獲得途徑，對患者造成很大的傷害，同時來源苦難以及受倫理限制等問題；經血源干細胞雖有少量研究，但是其無簡單方便的方法采集經血，導致經血受污染幾率較高，獲得的干細胞數量較少，純度較低，分化潛能較低，同時成本較高、過程復雜等。

發明內容

有鑒于此，本發明提供經血保存液及其應用、經血源宮內膜干細胞的分離培養方法。利用女性經血作為干細胞采集來源，廢物利用，變廢為寶，來源豐富；月經血中富含宮內膜干細胞的數量為骨髓的30倍有效成分含量豐富；采用經血保存液進行保存，避免經血在采集到分離的過程中受外界污染。本發明采用獨特配方的經血保存液對經血進行保存，顯著(P＜0.05)降低了經血的污染率，同時保證了獲得的經血源宮內膜干細胞的純度和活力。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種經血保存液，包括抗生素、枸櫞酸鈉和肝素鈉。

在本發明的一些具體實施方案中，所述經血保存液中所述抗生素選自青霉素、鏈霉素或卡那霉素。

在本發明的一些具體實施方案中，所述經血保存液中所述卡那霉素的濃度為30～50μg/mL。

在本發明的一些具體實施方案中，所述經血保存液中所述枸櫞酸鈉的濃度為30～50μg/ml。

在本發明的一些具體實施方案中，所述經血保存液中所述肝素鈉為100U/ml肝素鈉的磷酸鹽緩沖液。

在本發明的一些具體實施方案中，所述經血保存液包括(2～5)×青霉素、(2～5)×鏈霉素、30～50μg/ml卡那霉素、30～50μg/ml枸櫞酸鈉、100U/ml肝素鈉的磷酸鹽緩沖液。

本發明提供的所述經血保存液在保存經血中的應用。

本發明還提供了經血源宮內膜干細胞的分離培養方法，包括如下步驟：

步驟1：獲得經血；采用所述經血保存液保存所述經血；

步驟2：取所述經血稀釋后獲得經血稀釋液，與分離液混合、離心；