[發明專利]作為豬繁殖與呼吸綜合征病毒疫苗抗原的靶細胞特異性融合蛋白和疫苗組合物

有效

• 申請號: 201610075059.6
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105481953B
• 公開（公告）日: 2018-02-13
• 發明（設計）人: 徐宏軍;胡來根;岳豐雄;代洪波
• 申請（專利權）人: 成都天邦生物制品有限公司
• 主分類號: C07K14/08
• 分類號: C07K14/08;C12N9/88;A61K39/12;A61K47/42;A61P31/14
• 代理公司: 四川省成都市天策商標專利事務所51213
• 代理人: 劉興亮

技術領域

本發明涉及具備誘發豬體內產生豬繁殖與呼吸綜合征病毒的細胞免疫及中和抗體反應的靶細胞特異性融合蛋白亞單位疫苗。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是一種由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)感染后導致母豬繁殖障礙，并對不同日齡豬以呼吸道感染為主的急性傳染病。該病毒為單股正鏈RNA病毒，其容易感染T-細胞、樹突細胞、單核細胞或巨噬細胞。豬群一旦受PRRSV感染后，會破壞其肺泡巨噬細胞(porcine alveolar macrophages，PAMs)和肺血管內巨噬細胞(pulmonary intravascular macrophages，PIMs)，從而造成巨噬細胞的數量減少，減弱宿主免疫系統并增加機會性病原入侵宿主的機會；此外，受感染的單核細胞和巨噬細胞可攜帶病毒擴散至各個器官，并透過感染的單核細胞經由乳汁或精液將病毒傳給哺乳仔豬與配種母豬，以垂直及平行傳染的方式擴散病毒傳播。

PRRSV能誘導感染豬周邊血液單核細胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)的抗發炎細胞激素IL-10基因表現量顯著上升。顯示PRRSV可能經由誘導IL-10基因表現來抑制炎癥反應，使感染豬更容易遭到二次感染而造成更嚴重的損失。另有研究指出于PRRSV感染細胞前先投予IFN-γ，能有效抑制PRRSV的復制，且抑制效果與投予劑量有正相關性，若改投予豬IL-12重組蛋白，亦有類似結果，同時還發現IFN-γ被大量誘導而IL-10卻相對減少。由此顯示IL-12可加強抗原特異性細胞免疫并促進Th1免疫反應，產生大量的IFN-γ及抑制IL-10產生來拮抗PRRSV的感染與復制。MLV疫苗(Modified Live Virus，MLV)已被證實疫苗產生的細胞免疫反應與保護力是具有關聯性的，而且疫苗的保護力并非依靠體液免疫反應所產生的抗體；反而仰賴是細胞免疫反應所誘發的IFN-γ。

雖然市面上已有PRRSV疫苗銷售，但有研究報告表明某些疫苗免疫計劃完整的豬場仍會爆發PRRS疫情，顯示出現有疫苗可能無法提供交叉保護力以抵抗PRRSV野毒株的感染。此外，PRRSV又有抗體依賴性增強作用(antibody dependent enhancement，ADE)的現象存在，使得傳統滅活疫苗產生的非中和性抗體非但無保護效果反而使感染更加劇而引發更嚴重的感染，通常被PRRSV感染的動物無明顯癥狀，但被感染動物的免疫力降低而容易造成二次感染，導致生產性能下降與死亡率升高。

目前雖然已有PRRSV的減毒活疫苗問世，然而因PRRSV為一種RNA病毒，減毒活疫 苗效力常隨著野毒株的突變而失去保護效力。因為PRRSV易破壞宿主免疫系統的特性，而現行疫苗又無法安全有效且穩定的控制疫情，所以減少發生ADE效應以提升抗體保護力與細胞免疫反應是未來PRRSV疫苗的開發重點。

發明內容

[要解決的技術問題]

本發明的目的是解決上述現有技術存在的問題，提供一種作為豬繁殖與呼吸綜合征病毒疫苗抗原的靶細胞特異性融合蛋白和疫苗組合物及其應用。

[技術方案]

為了達到上述的技術效果，本發明采取以下技術方案：

一種作為豬繁殖與呼吸綜合征病毒疫苗抗原的靶細胞特異性融合蛋白，該靶細胞特異性融合蛋白的氨基酸序列包括以下序列：

(a)N-端酶結構域缺失之博得特氏菌的腺苷酸環化酶的氨基酸序列；

(b)抗原的氨基酸序列，其氨基酸序列是由

序列Ⅰ：豬繁殖與呼吸綜合征病毒的核蛋白部分序列，相應于第65～123氨基酸、

序列Ⅱ：北美株豬繁殖與呼吸綜合征病毒的膜蛋白M protein部分序列，相應于第2～26氨基酸、

序列Ⅲ：北美株豬繁殖與呼吸綜合征病毒的膜蛋白GP5部分序列，相應于第31-63氨基酸、

其中，所述抗原的氨基酸序列位于所述N-端酶結構域缺失之博得特氏菌的腺苷酸環化酶的氨基酸序列的N-端。

本發明更進一步的技術方案，所述抗原的氨基酸序列還包括：