[發明專利]一種磁性海藻酸鈉固化漆酶的制備方法

在審

• 申請號: 201610072431.8
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN105505914A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發明（設計）人: 陳明生;張帆;林大偉
• 申請（專利權）人: 江蘇時空涂料有限公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種磁性海藻酸鈉固化漆酶的制備方法，其特征在于具體制備步驟為：

（1）按接種量為培養基底物質量5～7%將白毒鵝膏菌接種到裝有50～100mL基礎液體培養基的300mL三角瓶中，放置在搖床上在25～30℃下以100～200rpm的速率恒溫振蕩培養3～5天，用無菌水淋洗菌絲表面并收集淋洗液，得到菌絲懸浮液，于4～6℃下保存；

（2）向80～100mL基礎液體培養基中分別加入1～2%（w/v）茶葉、1～2%（w/v）豆粕和1～2%（w/v）蔗渣組成的混合物以及5～10mL濃度為0.5mol/L硫酸銅溶液，混合均勻后再加入20～25mL上述制備的菌絲懸浮液，放入恒溫箱在25～35℃下發酵7～8天，再將發酵液移入臥式離心機，以7000～9000r/min轉速離心分離，得上清液即為漆酶酶液，備用；

（3）按摩爾比為3:2將濃度為0.3mol/L氯化鐵和0.2mol/L氯化亞鐵溶液混合均勻，取100～200mL混合液裝入300mL三口燒瓶中，用質量濃度為17%氨水調節pH至9～10后，向燒瓶中以10mL/min速率持續通入氮氣并移入水浴鍋中，升溫至75～85℃保溫熟化30～40min，在磁場作用下吸附分離，得納米級磁性粒子；

（4）取1～3g納米級磁性粒子在超聲作用下分散于40～50mL濃度為10%海藻酸鈉溶液中，制得混合液，用注射器向制得的混合液中注入200～300mL蓖麻油并移入高剪切乳化機，以12000～13000r/min轉速進行乳化，在乳化過程中再逐滴滴入5～10mL蔗糖脂肪酸酯，滴加完畢后繼續乳化5～10min；

（5）乳化結束后將乳化液倒入400～500mL質量濃度為5%氯化鈣溶液中，用攪拌棒攪拌均勻后靜置沉淀過夜，再過濾分離得到沉淀物，將得到的沉淀物用含有5%脂肪酸甘油酯水溶液沖洗1～2h，放入烘箱在105～110℃下干燥至恒重；

（6）稱取20～30g上述沖洗干燥后的烘干物放入裝有300～500mL步驟（2）制備的漆酶酶液的漩渦振蕩儀中，以30～50W功率在30～40℃下振蕩吸附12～24h后濾出，真空干燥后即得一種磁性海藻酸鈉固化漆酶。

2.根據權利要求1所述的一種磁性海藻酸鈉固化漆酶的制備方法，其特征在于：所述的基礎液體培養基是由1～1.2L馬鈴薯浸出液、15～25g葡萄糖、2～3g蛋白胨、3～5g磷酸二氫鉀和2～4g硫酸鎂混合而成。