[發明專利]用于檢測具有國家限量標準的5種食品致病菌的引物組合及其應用

有效

• 申請號: 201610069672.7
• 申請日: 2016-02-01
• 公開（公告）號: CN107022601B
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 張巖;劉銘;邢婉麗
• 申請（專利權）人: 博奧生物集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/42;C12R1/445;C12R1/19;C12R1/01;C12R1/63
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

本發明公開了一種用于檢測具有國家限量標準的5種食品致病菌的引物組合及其應用。本發明提供的引物組合由引物組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組成。引物組Ⅰ由Ⅰ?F3、Ⅰ?B3、Ⅰ?FIP、Ⅰ?BIP、Ⅰ?LF和Ⅰ?LB組成，引物組Ⅱ由Ⅱ?F3、Ⅱ?B3、Ⅱ?FIP、Ⅱ?BIP、Ⅱ?LF和Ⅱ?LB組成，引物組Ⅲ由Ⅲ?F3、Ⅲ?B3、Ⅲ?FIP、Ⅲ?BIP、Ⅲ?LF和Ⅲ?LB組成，引物組Ⅳ由Ⅳ?F3、Ⅳ?B3、Ⅳ?FIP、Ⅳ?BIP、Ⅳ?LF和Ⅳ?LB組成，引物組Ⅴ由Ⅴ?F3、Ⅴ?B3、Ⅴ?FIP、Ⅴ?BIP、Ⅴ?LF和Ⅴ?LB組成，依次如序列1至30所示。本發明可用于檢測沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌O157、單核細胞增生李斯特氏菌或副溶血性弧菌，具有重大的推廣價值。

技術領域

本發明涉及一種用于檢測具有國家限量標準的5種食品致病菌的引物組合及其應用。

背景技術

沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌O157、單核細胞增生李斯特氏菌和副溶血性弧菌是重要的食源性致病菌，已被我國列為食品安全的常規檢測項目，并且針對這5種菌制訂了致病菌限量標準。沙門氏菌病是重要的人畜共患病原菌，其廣泛分布于自然界，主要以家畜、家禽、肉制品和蛋為傳播載體，可引起食物中毒、胃腸炎、人類的傷寒及副傷寒等腸道疾病，嚴重者可導致死亡，是各國公認、全球報道最多、世界最常見引發食源性疾病暴發的首要病原菌，也是我國食源性疾病的主要病原體；金黃色葡萄球菌廣泛分布于自然界，近年來由其引起的食物中毒已呈現出全球的分布狀態，已經成為世界公共衛生的一個重要問題。它不僅存在于速凍米面制品中，乳制品和肉類等也通常含有金黃色葡萄球菌的腸毒性菌株，進食被金黃色葡萄球菌污染的食物易導致惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等急性胃腸炎癥狀，嚴重的會導致死亡；大腸埃希氏菌O157是近幾十年來新發現的食源性強致病菌，牛肉、生奶、雞肉及其制品，蔬菜、水果及制品等均可引起污染，其中牛肉是最主要的傳播載體。感染少量即可致病，致死率高，能夠引起頑固性腹瀉及溶血性尿毒癥等各種并發癥，嚴重威脅公共衛生安全；單核細胞增生李斯特氏菌是一種人畜共患病的食源性致病菌，廣泛存在于自然界中，，主要傳播媒介為乳制品、肉制品、水產品、果蔬和即食食品，人類受感染后主要表現為敗血癥、腦膜炎、胃腸炎、孕婦流產等癥狀。嬰幼兒，老年人及免疫耐受病人臨床死亡率為30％左右，很多國家都已經采取措施以控制食品中的單核細胞增生李斯特氏菌，并制定了相應的標準；副溶血性弧菌廣泛分布于海水和海產品中，是引起食源性疾病暴發的重要病原菌之一，能夠引起人類腸胃炎，我國沿海城市副溶血性弧菌引起的食源性疾病暴發在全部食源性疾病暴發中已占首位，部分地區已占到60％左右。

基于傳統分離方法的國標法GB依然是目前很多檢測機構在進行具有國家限量標準的5種食品致病菌檢測的主要依據。主要包括增菌培養，平板分離，生化鑒定等步驟。檢測方法繁瑣，檢測時間長，靈敏度低，容易發生漏檢和錯檢，傳統的檢測方法已無法滿足目前食品快速檢測的要求。近幾年發展起來的分子檢測技術,特別是PCR技術,在微生物快速鑒定和檢測方面的應用,為食源性致病菌的快速檢測開辟了新的途徑。但是,PCR存在檢測時間長、易污染、假陽性率高的缺點,使其應用受到限制。環介導等溫擴增技術(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年來發展出的一種敏感、特異、簡便、快捷的核酸擴增技術,其原理是在一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶的作用下，識別6～8個區域的4～6條引物，在等溫條件下快速、特異地擴增目的基因，可推廣應用于快速、準確的檢測常見的食源性微生物。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于檢測具有國家限量標準的5種食品致病菌的引物組合及其應用。

本發明首先提供了一種引物組合，為如下(a1)或(a2)或(a3)：

(a1)由引物組Ⅰ、引物組Ⅱ、引物組Ⅲ、引物組Ⅳ和引物組Ⅴ組成；

(a2)由所述引物組Ⅰ、所述引物組Ⅱ、所述引物組Ⅲ、所述引物組Ⅳ和所述引物組Ⅴ中的任意兩個、任意三個或任意四個組成；