[發明專利]一種含有DNA片段和有機染料的檢測溶液及其應用

在審

• 申請號: 201610064718.6
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105717081A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 魏輝;程翰俊
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

1.一種含有DNA片段和有機染料的檢測溶液，其特征在于，該檢測溶液中包括有富含鳥嘌呤的單鏈DNA片段，鈉離子和作為信號輸出分子的有機小分子染料。

2.根據權利要求1所述的含有DNA片段和有機染料的檢測溶液，其特征在于，該單鏈DNA片段在單獨含有Na⁺的溶液中形成反平行的DNA四鏈體結構。

3.根據權利要求1所述的含有DNA片段和有機染料的檢測溶液，其特征在于，在該單鏈DNA片段的Na⁺溶液中加入K⁺，則其由反平行的DNA四鏈體結構變成正平行的DNA四鏈體結構。

4.根據權利要求1所述的含有DNA片段和有機染料的檢測溶液，其特征在于，所述單鏈DNA片段的堿基序列為5’-GTGGGTAGGGCGGGTTGG-3’。

5.一種基于DNA技術的生物體內K⁺的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）特定序列DNA制備：利用固相合成技術制備所設計的單鏈DNA片段，經分離純化后得到權利要求1所述的特定序列的單鏈DNA片段；

2）配制DNA儲備液：配制適合pH值及化學組分的緩沖溶液即TE緩沖液待用；取一定量步驟1）的單鏈DNA片段溶于該緩沖液中得到DNA儲備液；

3）配制反平行單鏈DNA檢測液：取一定量DNA儲備液，向其中加入一定量的NaCl和有機染料并用TE緩沖液稀釋，經加熱退火后得到反平行單鏈DNA檢測液。

4）K⁺檢測：將步驟3）中的反平行單鏈DNA檢測液分別與不含K+的空白樣品以及含有K⁺的樣品以適合體積比混合后置于37℃環境中避光反應，然后檢測所得樣品中的熒光信號，根據這兩者熒光強度的比值即可得到K⁺的濃度值。

6.根據權利要求5所述的一種基于DNA技術的生物體內K⁺的檢測方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

1）DNA制備：利用PCR反應制備所設計的DNA，經凝膠電泳分離，純化后得到特定序列的DNA；

2）配制DNA儲備液：配制pH為7.0，含有2.5mMEDTA的50mMTris-HCl緩沖溶液即TE緩沖溶液待用；取一定量單鏈DNA溶于該TE緩沖液中，配制濃度為400μM的DNA儲備液；

3）配制反平行單鏈DNA檢測液：取一定量DNA儲備液，向其中加入一定量的NaCl和有機染料并用TE緩沖液稀釋，最終溶液中含有DNA濃度為20μM，有機染料濃度為20μM，Na⁺濃度為200mM，將該溶液置于90℃下水浴加熱10min后緩慢降溫至室溫，然后避光保存待用；

4）K⁺檢測：將步驟3）中的反平行單鏈DNA檢測液分別與不含K+的空白樣品以及含有K⁺的樣品以1:1的體積比混合后置于37℃環境中避光反應，然后檢測所得樣品中的熒光信號，根據這兩者熒光強度的比值即可得到K⁺的濃度值。