[發(fā)明專利]一類磷光銥配合物的合成及其用于血吸蟲成蟲的熒光標(biāo)記

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610060560.5
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105601675B
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳勇權(quán);范小林;曾冠杰;吳任苗;江天宇;李億保
• 申請（專利權(quán)）人: 贛南師范大學(xué)
• 主分類號: C07F15/00
• 分類號: C07F15/00;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 贛州智府晟澤知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 36128
• 代理人: 鄒圣姬

1.一種磷光銥配合物，其特征在于：具有下式結(jié)構(gòu)的磷光化合物：

其中n＝3。

2.一種制備如權(quán)利要求1所述的磷光銥配合物的方法，其特征在于：所述磷光銥配合物可通過以下路線合成：

其中PEG-Ts結(jié)構(gòu)式如下：

雙齒配體結(jié)構(gòu)式如下：

將三氯化銥水合物與含親水基的雙齒配體在2-乙氧基乙醇和水的混合溶液中加熱反應(yīng)12至48小時，合成得到銥二氯橋配合物；然后，得到的銥二氯橋配合物在有機(jī)溶劑、水或者混合溶劑中與相應(yīng)的輔助配體反應(yīng)4至12小時，合成終產(chǎn)物。

3.一種對如權(quán)利要求1所述的磷光銥配合物的應(yīng)用，其特征在于：所述磷光銥配合物用于以非診斷治療為目的的血吸蟲成蟲熒光標(biāo)記。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，血吸蟲成蟲熒光標(biāo)記成像方法包括如下步驟：

血吸蟲尾蚴獲得：新鮮的尾蚴從感染毛蚴的陽性的釘螺得到，取陽性螺于100mL錐形瓶中，加入清水至瓶口，在白熾燈下光照2小時左右逸出尾蚴；

小鼠感染：將六周齡雌性小鼠四肢固定于自制架子上，腹部去毛，取溫水濕潤小鼠腹部皮膚，并將含有45-55條尾蚴的蓋玻片貼于小鼠去毛的腹部皮膚上，保持20分鐘使尾蚴穿透小鼠皮膚進(jìn)行感染；

血吸蟲成蟲獲得：將感染后的小鼠飼養(yǎng)6周后，使用頸部脫臼處死，嚴(yán)格按照無菌操作要求，依次剖開腹部皮膚、腹膜，采取灌注法于肝門-腸系膜靜脈中收集成蟲；將收集到的成蟲在生理鹽水中漂洗3次后分配到培養(yǎng)皿中，加入RPMI-1640(RoswellParkMemorialInstitute-1640)細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)2小時后，鏡檢篩選活性良好的蟲體用于熒光成像；

血吸蟲成蟲熒光成像：磷光配合物用二甲基亞砜(DMSO)溶解準(zhǔn)確配制成1mmol的母液，然后再用PBS緩沖液稀釋成5μM的稀釋液；移取200μL的稀釋液加入到培養(yǎng)皿中，用鑷子挑取成蟲加入到磷光配合物稀釋液中，于室溫孵育5分鐘至6小時后，將成蟲轉(zhuǎn)移到熒光成像器皿，在405nm激發(fā)下共聚焦熒光顯微鏡觀察尾蚴的磷光標(biāo)記情況，并采集520-620nm的磷光信號進(jìn)行熒光成像。