[發(fā)明專利]一種免疫細胞凍存液及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610056699.2
• 申請日: 2016-01-27
• 公開（公告）號: CN105638642B
• 公開（公告）日: 2018-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉軍;唐歡
• 申請（專利權(quán)）人: 上海潤泉生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;侯瀟瀟

1.一種免疫細胞凍存液，其特征在于，所述免疫細胞凍存液包括：重組人白介素-2 50-200U/mL；聚乙二醇0.1-0.4g/mL；1,2-丙二醇0.2-0.4g/mL；基礎(chǔ)培養(yǎng)基或注射用氯化鈉90-99體積％。

2.如權(quán)利要求1所述的免疫細胞凍存液，其特征在于，所述免疫細胞凍存液包括：重組人白介素-2 80-180U/mL；聚乙二醇0.2-0.4g/mL；1,2-丙二醇0.25-0.4g/mL；基礎(chǔ)培養(yǎng)基或注射用氯化鈉95-99體積％。

3.如權(quán)利要求1或2所述的免疫細胞凍存液，其特征在于，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為RPMI-1640培養(yǎng)基或淋巴細胞培養(yǎng)基。

4.如權(quán)利要求3所述的免疫細胞凍存液，其特征在于，所述淋巴細胞培養(yǎng)基為GT-T551培養(yǎng)基或GT-T561培養(yǎng)基。

5.如權(quán)利要求1所述的免疫細胞凍存液，其特征在于，所述免疫細胞凍存液還含有Ultroser G、自體血漿或胎牛血清中的任意一種。

6.如權(quán)利要求5所述的免疫細胞凍存液，其特征在于，所述Ultroser G的含量為0.2-1.8g/mL。

7.如權(quán)利要求5所述的免疫細胞凍存液，其特征在于，所述自體血漿的含量為10-90體積％。

8.如權(quán)利要求5所述的免疫細胞凍存液，其特征在于，所述胎牛血清的含量為10-90體積％。

9.如權(quán)利要求1所述的免疫細胞凍存液，其特征在于，所述免疫細胞凍存液進一步含有人血白蛋白或丙三醇。

10.如權(quán)利要求9所述的免疫細胞凍存液，其特征在于，所述人血白蛋白的含量為0.05-10.1g/mL。

11.如權(quán)利要求9所述的免疫細胞凍存液，其特征在于，所述丙三醇的含量為10-20體積％。

12.如權(quán)利要求1-11任一項所述的免疫細胞凍存液在免疫細胞凍存復(fù)蘇中的應(yīng)用。

13.如權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其特征在于，所述免疫細胞為T細胞、自然殺傷細胞或NTK細胞中的任意一種。

14.一種免疫細胞的凍存方法，其特征在于，其包括：

(1)將免疫細胞與權(quán)利要求1-11任一項所述的免疫細胞凍存液混合；和

(2)進行程序降溫至-80℃，然后轉(zhuǎn)移至液氮中冷凍保存。

15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)凍存液的制備：制備如權(quán)利要求1-11任一項所述的免疫細胞凍存液；

(2)細胞懸液的制備：將供體資源離心后，分離去除上層血漿，并將下層濃血離心，分離獲得免疫細胞，將所述免疫細胞與所述免疫細胞凍存液混合得到細胞懸液，置于無菌的凍存管中；

(3)冷凍：將所述凍存管進行程序降溫至-80℃，然后轉(zhuǎn)移至液氮中冷凍保存；

(4)細胞復(fù)蘇：取出凍存管快速置于37-40℃水浴1-3分鐘，振蕩直至細胞懸液完全融化，經(jīng)離心，以淋巴細胞無血清培養(yǎng)基洗滌2-3次，即得。

16.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述供體資源為外周血或臍帶血。

17.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述離心的轉(zhuǎn)速為2000-3000轉(zhuǎn)/分鐘；所述離心的時間為10-20分鐘。

18.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述細胞懸液的濃度為5-10×10⁶個細胞/mL。