[發明專利]酶標板包被液、封閉液及酶標板制作方法

有效

• 申請號: 201610050872.8
• 申請日: 2016-01-26
• 公開（公告）號: CN105588937B
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發明（設計）人: 危林丹;韓敏;余春湖
• 申請（專利權）人: 上海馥地檢測技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/31
• 代理公司: 上海領洋專利代理事務所(普通合伙)31292
• 代理人: 羅曉鵬,邱江霞

技術領域

本發明屬于酶標板包被技術領域，具體涉及酶標板包被液、酶標板封閉液及預包被酶標板的制作方法。

背景技術

酶聯免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)具有高靈敏度、高特異性、易于標準化等諸多優點，被廣泛應用于生物醫療體外診斷、生命科學研究、食品安全檢測等方面。

ELISA方法是利用了抗原與抗體的特異反應以及酶與底物產生的顏色反應，原理為抗原或抗體與酶連接形成酶標抗原或抗體，再與對應的抗體或抗原反應，然后通過酶與底物產生顏色反應，通過測定顏色的變化來進行定性或定量測定，測定的對象可以是抗體也可以是抗原。ELISA方法首先需要將抗原或抗體先結合在固相載體上，例如聚苯乙烯材質的酶標板的微孔中，該過程稱為包被。商業化的ELISA試劑盒，在出廠之前酶標板上就已經預先包被了抗原或抗體?？乖蚩贵w在酶標板中的包被質量，即包被在固相載體上的各微孔中的抗原或抗體的均一度直接決定ELISA試劑盒的檢測結果的準確性。

抗原或抗體在酶標板中的包被質量受機器狀態、操作手法、包被條件、環境等因素的影響，包被過程不可避免的會出現一定幾率的不合格的預包被酶標板。而現有的預包被酶標板制作方法并不能在包被過程中對包被質量進行及時有效的檢測，常規的檢測方法是等到包被過程完全結束后再利用與檢測指標相對應的成套試劑通過一次到數次的孵育、洗板、顯色、終止等步驟才能明確預包被酶標板的質量，并且用于測試的預包被酶標板也會因為測試而報廢。

常規的檢測方法并不能對不合格品進行有效鑒別，不同預包被酶標板質量不均，穩定性得不到保障，從而影響檢測結果的穩定性，檢測結果的穩定性不夠是ELISA方法最糟詬病的缺點之一，″試劑盒穩定性″問題在國產ELISA試劑盒產品中尤為突出。

發明內容

因此，針對現有的預包被酶標板制作方法不能對包被均一度進行有效檢測的技術問題，本發明目的在于提供一種酶標板包被液和一種酶標板封閉液以及一種配合使用所述酶標板包被液和所述酶標板封閉液的可在包被制作過程中進行包被均一度檢測的預包被酶標板的制作方法。

本發明的酶標板包被液含有的pH＝9.6的碳酸鹽緩沖溶液，還含有葡萄糖-6-磷酸脫氫酶。

所述酶標板包被液中，G-6-PD的酶活性為50～500UI/MG；G-6-PD的濃度為5～50μg/L，優選15～35μg/L，更優選20～30μg/L，最優選25μg/L。

本發明的酶標板封閉液含有pH＝8.0的磷酸鹽緩沖液、吐溫-20和BSA，還含有氧化型輔酶和6-磷酸葡萄糖。

所述酶標板封閉液中，NADP+的濃度為0.1～1mmol/L，優選0.15～0.5mol/L，更優選0.2～0.4mol/L，最優選0.3mmol/L；G-6-P的濃度為0.05～1mmol/L，優選0.08～0.4mmol/L，更優選0.1mmol/L。

所述酶標板封閉液中，吐溫-20的體積分數為0.05％，BSA的濃度為0.5～5g/L，優選0.5～1g/L，更優選0.5g/L。

本發明的預包被酶標板的制作方法，其包括步驟：

1)用所述酶標板包被液溶解待包被的抗體或抗原；

2)步驟1)得到的酶標板包被液加入待包被的酶標板的各個微孔中，4℃～37℃包被2～10小時；

3)所述酶標板用洗滌液洗2～5優選3次，并拍干；

4)向所述酶標板的各個微孔中加入所述酶標板封閉液，37℃(封閉1～2小時，然后棄去封閉液、拍干、烘干；

步驟4)中酶標板封閉液封閉0.5～2小時后檢測所述酶標板的包被均一度。

步驟1)中溶解后抗體或抗原在所述酶標板包被液中的濃度為0.1～10μg/mL，優選1～5μg/mL，更優選2μg/mL。

步驟2)中所述酶標板包被液的加入量為50～100μL/孔；步驟3)中，所述洗滌液用量為350μL/孔/次；步驟4)所述酶標板封閉液的加入量為250μL/孔。

步驟3)中所述洗滌液可選用通用試劑盒洗滌液，比如含有0.05％吐溫-20的磷酸鹽緩沖溶液。

步驟4)中檢測所述酶標板的包被均一度具體是將所述酶標板各個微孔內封閉液在340nm波長處的吸光度，計算各個微孔吸光度的變異系數，所述變異系數反映所述酶標板的包被均一度。