[發明專利]一種高通量檢測液態乳制品中脂肪酶酶活性的方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201610048536.X
• 申請日: 2016-01-25
• 公開（公告）號: CN105651715B
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發明（設計）人: 呂加平;張維清;逄曉陽;劉鷺;張書文;蘆晶
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農產品加工研究所
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;王春霞

本發明公開了一種高通量檢測液態乳制品中脂肪酶酶活性的方法及其試劑盒。本發明提供的檢測液態乳制品中脂肪酶酶活性的試劑盒，包括獨立包裝的試劑1和試劑2；所述試劑1為甘氨酸?氫氧化鈉緩沖液，所述試劑1的pH值為8.0～10.0；所述試劑2為對硝基苯酯的乙腈溶液。本發明提供了利用所述試劑盒檢測液態乳制品中脂肪酶酶活性的方法，為原料乳的分級提供了理論依據，同時可以制定適于生產加工各種液態奶的生鮮乳質量控制指標，如預測UHT乳貨架期，科學指導UHT產品的分區銷售，降低因殘留脂肪酶酶活導致產品變質、維護企業利益和消費者健康等。本發明檢測方法靈敏度高，脂肪酶的檢測閾值低。

技術領域

本發明涉及一種高通量檢測液態乳制品中脂肪酶酶活性的方法及其試劑盒，屬于食品檢測領域。

背景技術

目前，我國液態奶的消費逐年上升，是人類理想的營養食品，但由于微生物污染繁殖及其產生的代謝物質，發生品質劣變，嚴重時影響身體健康。原料奶位于乳業產業鏈的最上游，其品質將直接影響到乳制品的質量和安全。原料奶從擠乳開始到加工前，處于冷鏈保藏，污染的微生物主要以嗜冷菌為主，在此期間，嗜冷菌屬中的某些細菌如熒光假單胞菌可產生耐熱性脂肪酶，即使經過瞬時超高溫(簡稱UHT，135℃～150℃，3～5s)滅菌處理，脂肪酶仍然會殘留20％～30％酶活。相反的，牛乳中脂蛋白酯酶經過巴氏殺菌即可完全滅活。殘留的微生物耐熱性脂肪酶造成原料乳和貨架期內的巴氏乳、UHT乳等液態奶制理化和感官品質下降，如脂肪上浮、乳脂分離、脂肪酸敗、牛乳膻味和哈喇味等。由于這一情況，使我國液態乳制品常常出現質量問題，嚴重影響其營養價值和消費者的健康，給乳制品企業也帶來了很大的經濟損失。

脂肪酶酶活的檢測方法可以大致歸結為三大類，即滴定法、平板法和比色法。滴定法基于脂肪酶水解乳脂肪釋放脂肪酸導致反應液pH降低，使用氫氧化鈉溶液滴定或者pH檢測儀。平板法基于脂肪酶以三丁酸甘油脂為底物，將其水解,從而使含有三丁酸甘油脂的瓊脂產生肉眼可見的亮斑，測得亮斑的直徑再通過換算即可知道乳中的脂肪酶活性。比色法基于脂肪酶水解對硝基苯酯等物質，釋放在一定波長下具有吸收峰的物質，通過測量的吸光值來表征脂肪酶酶活性大小。另外，還有電導率法、紅外線光譜法、酶偶聯法等。目前，國標中脂肪酶酶活檢測采用氫氧化鈉滴定法(QB/T 1803-1993)，采用橄欖油和聚乙烯醇乳化液作為反應底物，屬于滴定法的一種，此方法繁瑣耗時、誤差大。因此，亟需提供一種高通量、快速地測出液態奶中脂肪酶酶活的方法。

發明內容

針對現有技術中液態乳制品中脂肪酶酶活檢測的不足，本發明的目的是提供一種高通量、高靈敏度檢測脂肪酶的方法。

本發明首先提供一種檢測液態乳制品中脂肪酶酶活性的試劑盒，包括獨立包裝的試劑1和試劑2；

所述試劑1為甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液，所述試劑1的pH值為8.0～10.0；

所述試劑2為對硝基苯酯的乙腈溶液。

上述的試劑盒中，所述甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液中，甘氨酸的摩爾濃度可為100～200mM，具體可為150mM，氫氧化鈉的摩爾濃度可為38～76mM，具體可為56mM；

所述甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液的pH值可為9.40。

上述的試劑盒中，所述試劑2中，所述對硝基苯酯的摩爾濃度可為40～60mM，具體可為50mM。

上述的試劑盒中，所述對硝基苯酯可為對硝基苯棕櫚酸酯。

上述的試劑盒中，所述試劑盒還包括終止液，所述終止液可為乳品澄清劑，如購自Sigma-Aldrich Co.LLC.的貨號為00467、目錄號為101325727的商品。

本發明還進一步提供了利用所述試劑盒檢測液態乳制品中脂肪酶酶活性的方法，包括如下步驟：

(1)配制至少5種標準液態乳制品，其中將脂肪酶的酶活為零的標準液態乳制品作為空白對照品；