[發(fā)明專利]一種高通量檢測液態(tài)乳制品中脂肪酶酶活性的方法及其試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610048536.X
• 申請日: 2016-01-25
• 公開（公告）號: CN105651715B
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂加平;張維清;逄曉陽;劉鷺;張書文;蘆晶
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;王春霞

1.一種液態(tài)乳制品中脂肪酶酶活性的檢測方法，包括如下步驟：

(1)配制至少5種標(biāo)準(zhǔn)液態(tài)乳制品，空白對照以蒸餾水或去離子水代替液態(tài)乳制品；

(2)將所述標(biāo)準(zhǔn)液態(tài)乳制品分別與試劑1于酶標(biāo)板中進(jìn)行混合并孵育；

所述酶標(biāo)板為96孔酶標(biāo)板；

(3)向所述標(biāo)準(zhǔn)液態(tài)乳制品與所述試劑1的混合液中加入試劑2，進(jìn)行反應(yīng)；所述反應(yīng)結(jié)束后加入終止液進(jìn)行終止反應(yīng)；檢測所述終止反應(yīng)后的體系在發(fā)射波長為400～420nm下的吸光值，其中所述空白對照品的吸光值計(jì)為A_空白，脂肪酶的酶活不為零的所述標(biāo)準(zhǔn)液態(tài)乳制品的吸光值計(jì)為A_{標(biāo)準(zhǔn)}，以所述標(biāo)準(zhǔn)液態(tài)乳制品的脂肪酶的酶活為橫坐標(biāo)，以A_{標(biāo)準(zhǔn)}與A_空白的差值作為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(4)將待測液態(tài)乳制品與所述試劑1進(jìn)行混合并孵育，然后重復(fù)步驟(3)，得到體系在發(fā)射波長為400～420nm下的吸光值A(chǔ)_樣品；根據(jù)所述標(biāo)準(zhǔn)曲線和A_樣品，即得到待測液態(tài)乳制品中脂肪酶的酶活性；

所述酶活性的單位定義為：脂肪酶水解對硝基苯酯，每分鐘釋放1μmol對硝基苯酚的酶量，表示為U/mL；

所述試劑1為甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液，所述試劑1的pH值為8.0～10.0；

所述試劑2為對硝基苯棕櫚酸酯的乙腈溶液；

所述終止液為乳品澄清劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)液態(tài)乳制品中脂肪酶的酶活性為0～10U；

步驟(2)和(4)中，所述標(biāo)準(zhǔn)液態(tài)乳制品或所述待測液態(tài)乳制品與所述試劑1的體積比為1：2～10；

步驟(2)和(4)中，所述孵育的溫度為40～50℃，所述孵育的時(shí)間為3～10分鐘；

步驟(3)中，所述試劑2與所述標(biāo)準(zhǔn)液態(tài)乳制品的體積比為1：0.5～1.5，所述反應(yīng)的溫度為40～50℃，所述反應(yīng)的時(shí)間為15～30分鐘；

所述終止液與所述標(biāo)準(zhǔn)液態(tài)乳制品的體積比4～6：1，所述終止反應(yīng)的溫度為40～50℃，所述終止反應(yīng)的時(shí)間為3～10分鐘；

步驟(3)和(4)中，檢測體系在發(fā)射波長為405～412nm下的吸光值。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于：所述液態(tài)乳制品為生鮮乳、巴氏奶、UHT乳或復(fù)原乳。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于：所述甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液中，甘氨酸的摩爾濃度為100～200mM，氫氧化鈉的摩爾濃度為38～76mM；

所述甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液的pH值為9.40。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于：所述試劑2中，所述對硝基苯棕櫚酸酯的摩爾濃度為40～60mM。