[發明專利]一種制備萊菔子分離蛋白粉和水解濃縮液的方法

在審

• 申請號: 201610044381.2
• 申請日: 2016-01-21
• 公開（公告）號: CN105566444A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 晏艷;周小華;石業新;宿長瓊;余紅梅;楊洋;袁德寬;姚萍
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: C07K1/34
• 分類號: C07K1/34;C12P21/06;A61K8/97;A61K8/64;A61Q19/00
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1.一種制備萊菔子分離蛋白粉和水解濃縮液的方法，其特征在于具體的工藝步驟如下：

制備萊菔子殘渣

按照脫脂萊菔子粉質量(kg)與pH為3～4檸檬酸溶液的體積(L)比為1∶4～8的比例， 先將該檸檬酸溶液泵入不銹鋼水解罐，開啟攪拌器和循環熱水，待檸檬酸溶液升溫至30～40℃ 時，再將脫脂萊菔子粉加入，接著，在30～40℃下攪拌水解4～8小時，水解完成后，將水解 物放料，進入碟式離心機，于5000～6000r/min的條件下進行第一次離心分離并分別收集第一 次水解離心分離渣和水解離心上層清液，對收集的第一次水解離心分離渣，用螺桿泵泵入洗 滌釜中，加入純凈水進行攪拌洗滌兩次，每次洗滌時間均為15～30分鐘，每次洗滌時純凈水 加入體積均與上述檸檬酸溶液體積相同，每次洗滌完成后，都將洗滌物放料進入碟式離心機， 于5000～6000r/min的條件下進行離心分離并分別收集洗滌離心分離渣和洗滌離心上層清液， 對收集的第一次水解離心上層清液和兩次洗滌離心上層清液，進行合并，即為萊菔素水解液， 用于萊菔素的制備；對收集的洗滌離心分離渣，即為萊菔子殘渣，用于下一步萊菔子分離蛋 白提取液的制備；

制備萊菔子分離蛋白提取液

按第1步收集的萊菔子殘渣質量(kg)與pH為5～6.5檸檬酸溶液體積(L)比為1∶4～8 的比例，先將該檸檬酸溶液泵入不銹鋼提取罐，開啟攪拌器和循環熱水，待檸檬酸液升溫至 45～65℃時，再將萊菔子殘渣加入，接著，在45～65℃下攪拌提取3～5小時，提取完成后，將 提取物放料進入碟式離心機，于5000～6000r/min的條件下進行第一次離心并分別收集第一次 提取離心分離渣和第一次提取離心上層清液，對收集的第一次提取離心分離渣，加入檸檬酸 溶液進行第二次提取，第二次提取時檸檬酸溶液的加入體積、pH值、濃度、提取時間及離心 分離的條件均與第一次提取時相同，第二次提取和離心分離完成后，將第一次提取離心上層 清液和第二次提取離心上層清液合并，即制備出萊菔子分離蛋白提取液，用于下一步制備萊 菔子分離蛋白，對收集的第二次提取離心分離渣，進行洗滌離心操作，條件過程均與第1步 中洗滌離心操作相同，分別收集洗滌離心分離渣和洗滌清液，對收集的洗滌離心分離渣，烘 干后用作動物飼料或土壤改良劑；對收集的洗滌清液，進行回收檸檬酸處理，循環使用；

制備萊菔子分離蛋白

對第2步收集的萊菔子分離蛋白提取液，泵入截留分子量為50K～150KDa的超濾器中， 進行第一級超濾，以截留大分子多糖，超濾表壓為0.05～0.2MPa，直至截留液出現明顯沉淀 時停止，分別收集第一級超濾截留液和第一級超濾濾過液，對收集的第一級超濾截留液，進 行噴霧干燥，用于制備萊菔子多糖；對收集的第一級超濾濾過液，泵入截留分子量為 10K～30KDa的超濾器中，進行第二級超濾，超濾表壓為0.05～0.2MPa，直至截留液出現明顯 沉淀時停止，分別收集第二級超濾截留液和第二級超濾濾過液，對收集的第二級超濾截留液， 泵入碟式離心機，于3000～4000r/min的條件下進行離心分離，分別收集離心渣和離心清液， 對收集的離心渣，即為萊菔子分離蛋白，一部分用于制備萊菔子分離蛋白凍干粉，另一部分 用于制備萊菔子分離蛋白水解液；對收集的離心清液，與第二級超濾濾過液合并，泵入截留 分子量為150～500Da的納濾器中進行納濾處理，納濾表壓為0.2～0.5MPa，直至納濾截留液體 積為納濾濾過液體積的1/5～1/10時停止，分別收集納濾截留液和納濾濾過液，對收集的納濾 截留液，含檸檬酸，與第2步收集的洗滌清液合并，調節pH至3～4，后可再次回收用于下批 次脫脂萊菔子粉水解，生成萊菔素和萊菔子殘渣；對收集的納濾濾過液，進行生化處理，達 標后排放；

制備萊菔子分離蛋白凍干粉

將第3步收集的萊菔子分離蛋白用螺桿泵泵入冷凍干燥機，采用真空冷凍干燥法于-20℃ ～-50℃預先將萊菔子分離蛋白里面的水份凍結，凍結5～6小時，凍結實后將其放置于冷凍干 燥機內，開啟真空泵、真空計，再在真空無菌的環境下將萊菔子分離蛋白里面被凍結的水份 升華，冷凍干燥溫度為-60℃～-50℃，絕對真空度為20～50Pa，即得到萊菔子分離蛋白凍干粉；

制備萊菔子分離蛋白水解液

第3步完成后，將第3步收集的萊菔子分離蛋白用螺桿泵泵入水解罐，在攪拌下加入純 凈水分散10～20分鐘，按萊菔子分離蛋白質量(kg)與純凈水體積(L)之比為1∶10～20的 比例，向水解罐中加入物料，向水解罐夾層通入溫度為50℃～60℃的循環水升溫，待水解罐 內萊菔子分離蛋白分散液的溫度上升至50℃～60℃后，用稀氧化鈉溶液調節其pH至8.5～9.5， 再在攪拌下，按照諾維信3.0T堿性蛋白酶與萊菔子分離蛋白的質量之比為1∶50～200的比 例加入該酶，，進行第一級酶水解，水解時間1～3小時，水解溫度為50℃～60℃，第一級酶水 解完成后，再在攪拌下加入諾維信復合風味蛋白酶，進行第二級酶水解，水解時間為3～5小 時，水解溫度為50℃～60℃，加入該酶的質量與上述的諾維信3.0T堿性蛋白酶相同，第二級 酶水解完成后，即制備出萊菔子分離蛋白水解液，用于下步制備水解萊菔子分離蛋白濃縮液；

制備水解萊菔子分離蛋白濃縮液

第5步完成后，將第5步收集的萊菔子分離蛋白水解液用螺桿泵泵入脫色罐中，在攪拌 下升溫至80～95℃，再按照活性炭粉質量(kg)：萊菔子分離蛋白水解液體積(L)為1∶10～20 的比例，加入活性炭粉，在80～95℃的條件下攪拌脫色1～2小時，脫色完成后，在相對真空 度為-0.06～-0.09MPa下進行真空過濾，分別收集真空過濾渣和真空過濾液，對收集的真空過 濾渣，即為廢活性炭，送活性炭再生廠進行再生處理；對收集的真空過濾液，泵入截留分子 量為1K～3KDa的超濾器中進行超濾，超濾表壓為0.05～0.2MPa，直至超濾截留液的蛋白質質 量濃度達到15～20％時停止，分別收集超濾截留液和超濾濾過液，對收集的超濾截留液，即為 水解萊菔子分離蛋白濃縮液A，平均分子量為2.5K～3.5KDa，用于配制營養類發用洗滌劑； 對于收集的超濾濾過液，進行反滲透濃縮，反滲透表壓為0.1～0.5MPa，直至反滲透截留液中 蛋白質質量濃度達到10～15％時停止，分別收集反滲透濾過液和反滲透截留液，對收集的反滲 透濾過液，即為純凈水，可回用于下批次配制檸檬酸溶液；對于收集的反滲透截留液，即為 水解萊菔子分離蛋白濃縮液B，平均分子量為0.5K～2.5KDa，用于配制營養類護膚產品。