[發明專利]循環腫瘤細胞蛋白分型試劑盒

有效

• 申請號: 201610044255.7
• 申請日: 2016-01-22
• 公開（公告）號: CN106996975B
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發明（設計）人: 劉蘇燕;吳詩揚
• 申請（專利權）人: 益善生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

本發明涉及一種循環腫瘤細胞蛋白分型試劑盒，包括有：針對不同CTCs標志蛋白質的捕獲抗體，所述CTCs標志蛋白質包括有上皮細胞標志蛋白質、間質細胞標志蛋白質；所述上皮細胞標志蛋白質選自：EPCAM、E?cadherin、KRT5、KRT7、KRT8、KRT16、KRT17、KRT18、KRT19、KRT20；所述間質細胞標志蛋白質選自：N?cadherin、vimentin、fibronectin、MMP2、MMP3、MMP9、AKT2、ZEB1、FOXC1、FOXC2、SNAI1、SNAI2、SERPINE1；還包括針對不同CTCs標志蛋白質的標記抗體，本發明標志蛋白質的選取，除了能實現單個標志蛋白質的檢測外，還與其它標志蛋白質一起使用，從而能夠最全面地檢測出循環腫瘤細胞，并區分其細胞類型，解決了循環腫瘤細胞個體之間由于某些標志蛋白質表達水平的差異而造成假陰性結果。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體的是涉及一種循環腫瘤細胞蛋白分型試劑盒。

背景技術

腫瘤細胞獲得侵襲能力并發生遠處轉移是其導致患者死亡的主要原因。循環腫瘤細胞(circulating tumor cells,CTCs)于1869年首次被發現，它來源于原發腫瘤或轉移腫瘤，獲得脫離基底膜的能力并通過入侵組織基質進入血管，是存在于外周血中的各類腫瘤細胞的統稱。目前的腫瘤轉移理論認為，腫瘤細胞需要脫離原發灶，突破血管屏障并進入血液或淋巴循環才能在遠處形成轉移灶，所以CTC的形成可能是腫瘤轉移的早期階段。CTC是一群異質性細胞，根據標志蛋白的表達情況，主要將其分為上皮標志物陽性表型(簡稱上皮細胞型)、間質標志物陽性表型(簡稱間質細胞型)和上皮與間質混合表型(簡稱上皮-間質細胞型)等。目前以蛋白質檢測為靶點的分型技術主要是基于抗原抗體特異性結合反應原理，主要檢測標志蛋白包括：上皮細胞標志蛋白，如上皮細胞粘附分子(epithelial celladhesion molecule,EpCAM)、角蛋白(keratin,KRT)和E-鈣黏蛋白(E-cadherin)等；間質細胞標志蛋白，如N-鈣黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和纖連蛋白(fibronectin)等。上皮-間質轉換(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是腫瘤細胞發生轉移的關鍵步驟，EMT過程中，多種轉錄因子會發生活化表達，包括ZEB1、ZEB2、snail等。EMT的發生使原發腫瘤細胞的細胞間粘附作用下降，細胞遷移和侵襲性增加，失去上皮標志物獲得間質細胞表型并具有干細胞特性，已有研究表明，間質細胞型CTC具有最強的轉移潛能。

目前對CTCs的分型方法主要依賴于對細胞核酸和蛋白質的檢測，然而核酸檢測特異性差，易污染，產生假陽性結果。以蛋白質為靶點的分型技術主要包括熒光原位雜交法、免疫染色法、流式細胞術以及通過美國FDA批準進行臨床應用的CellSearch檢測系統等。常規的免疫染色法一次只能檢測一種抗原，操作程序復雜且有假陽性結果的存在；流式細胞術靈敏度低，且不能提供細胞形態學信息；而CellSearch檢測系統以上皮細胞標志物為靶點，無法檢測到丟失上皮抗原的CTC。目前使用較多的是熒光原位雜交技術，但由于該法存在非特異型性的抗原抗體反應且結果判定的客觀性不足等缺陷而影響檢測結果的準確性。因此，建立一種快速、精準的CTCs分型檢測方法對癌癥患者疾病的控制和治療至關重要。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種特異性強、靈敏度高和精確度高的循環腫瘤細胞蛋白分型試劑盒。

實現上述目的的技術方案如下。

一種循環腫瘤細胞蛋白分型試劑盒，包括有：

(1)針對不同標志蛋白質的捕獲抗體，所述捕獲抗體連接標志蛋白質和標記抗體，能與標志蛋白質和標記抗體發生特異性結合反應，不同捕獲抗體之間反應特性互不干擾；