[發明專利]一種利用愈傷組織繁殖香根草種苗的方法

有效

• 申請號: 201610032665.X
• 申請日: 2016-01-18
• 公開（公告）號: CN105638474B
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 陳吉寶;曹苑南;增輝;董海鴻;李丹丹
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙)11491
• 代理人: 姜彥

技術領域

本發明屬于植物繁殖技術領域，尤其涉及一種利用愈傷組織繁殖香根草種苗的方法。

背景技術

香根草(Vetiveria zizanioides L.)，又名培地茅、巖蘭草，是一種禾本科多年叢生的草本植物，原產于印度等國，現主要分布于東南亞、印度和非洲等(亞)熱帶地區，我國主要分布在廣東、云南等地。香根草極難結實或不結實，主要靠分蘗繁殖，即每年春季，上年留在田里的香根草根部會萌發新的分蘗，一般情況下，每兜香根草根部在春季可增生40株左右的分蘗。理論上講，每個分蘗都可以長成獨立的具有6-10節的莖，實際上，只有較大分蘗(平均有15株分蘗/兜)形成的莖節數可達6-10節。香根草具有適應能力強，生長繁殖快，根系發達，耐旱耐瘠等特性，在水土保持，改良生態環境、經濟開發利用中有重要的應用，受到國內外的廣泛重視并得到迅速的推廣。目前國內對香根草的需求較大，種苗供不應求，而導致種苗缺乏的主要原因是繁殖速度過慢。目前生產上香根草種苗繁殖方式有三種，一是通過分離香根草新生分蘗苗法獲得。該方法的優點是技術簡單，存在的主要問題是種苗繁殖系數低，一般情況下1畝香根草種苗圃可以繁殖4-6畝種苗，限制了香根草的大規模開發利用。二是直接利用香根草外植體(如葉鞘、莖段、蘗節等)，通過體細胞發育形成完整植株。第三種方法是應用香根草愈傷組織再生新苗。其生產程序是，先選擇外植體→外植體消毒→外植體接種在誘導培養基上誘導愈傷組織細胞形成→(或將愈傷組織細胞繼代培養)→將愈傷組織塊接種在生芽培養基上誘導生芽→將芽接種在生根培養基上誘導生根→成苗，形成一個完整的植株。后兩種方法的優點是繁殖系數較低一種方法明顯增高，但是存在培養過程污染率不容易控制的問題。污染的主要原因是誘導成苗過程需要轉接3次，每一次轉接都有可能引起污染。

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用愈傷組織繁殖香根草種苗的方法，旨在解決現有的繁殖香根草種苗方法存在培養過程污染率不容易控制的問題。

本發明是這樣實現的，一種利用愈傷組織繁殖香根草種苗的方法，所述利用愈傷組織繁殖香根草種苗的方法包括：

配制培養基，培養基成分包括，1×MS營養元素，30g/L蔗糖、7g/L瓊脂、2mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA；培養基用5mol/L的氫氧化鈉調至pH＝5.5～6.5，高溫濕熱滅菌20～30分鐘，后冷卻至50℃時，分裝在無菌組配瓶內，自然冷卻凝固后備用；S102：選取外植體：從生長健壯、無病蟲害的香根草基部剪取具4個以上莖節的莖，去除葉、葉鞘和頂芽，在莖節上下1cm處用剪刀剪斷，留下帶掖芽的莖段作為外植體；

組培苗培養：將接種的培養瓶密封瓶口，然后放置在25±1℃培養室內先暗培養3天，然后在16/18光暗交替下繼續培養，在培養的第30天在掖芽基部切口處形成愈傷組織，第50天愈傷組織分化形成叢狀新芽，第70天在新芽周圍長出新根，形成高3cm的叢狀香根草幼苗。

進一步，所述配制培養基后需要：

選取外植體：從生長健壯、無病蟲害的香根草基部剪取具4個以上莖節的莖，去除葉、葉鞘和頂芽，在莖節上下1cm處用剪刀剪斷，留下帶掖芽的莖段作為外植體；

消毒外植體：取所修剪后莖段，放入去污液中并浸泡2h，然后用流水清洗浸泡后的莖稈2h；接著在工作臺內再依次分別用75％酒精、0.1％升汞和5％的多菌靈浸沒莖段消毒0.5、6和10分鐘，最后用無菌水沖洗莖段4-6遍，于無菌濾紙上晾干后備用；

接種外植體：取消毒晾干后的莖段，在超凈工作臺內用無菌剪刀將掖芽基部0.1-0.3cm以上頂端部分剪去；用無菌解剖刀在莖節基部等距離縱切3個傷口，傷口深度0.1cm，傷口長度均為0.3cm；用無菌鑷子將去除掖芽頂端且切傷后的莖段按自然生長方向插入培養基中，扎入深度為莖節基部剛好接觸培養基上平面。

進一步，所述去污液為1％洗衣粉的蒸餾水。

進一步，所述組培苗培養后需要：

配制幼苗移栽培養基：營養土培養基由花土、壤土和沙按照1：1：1的比例配制，營養缽選用高度為25cm，缽底和缽口直徑不小于5cm，混勻的營養土盛裝在營養缽內，營養土培養基用量為營養缽高度的1/2，移栽前將裝有營養土培養基的營養缽放置在自來水內，使營養土飽和吸水，然后再將營養缽自然控水5小時后備用；