[發明專利]一種利用愈傷組織繁殖香根草種苗的方法

有效

• 申請號: 201610032665.X
• 申請日: 2016-01-18
• 公開（公告）號: CN105638474B
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 陳吉寶;曹苑南;增輝;董海鴻;李丹丹
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙)11491
• 代理人: 姜彥

1.一種利用愈傷組織繁殖香根草種苗的方法，其特征在于，所述利用愈傷組織繁殖香根草種苗的方法包括：

配制培養基：培養基成分包括1×MS營養元素，30g/L蔗糖、7g/L瓊脂、2mg/L6-BA、0.2mg/LIBA；培養基用5mol/L的氫氧化鈉調至pH＝5.5～6.5，高溫濕熱滅菌20～30分鐘，后冷卻至50℃時，分裝在無菌組配瓶內，自然冷卻凝固后備用；

組培苗培養：將接種的培養瓶密封瓶口，然后放置在25±1℃培養室內先暗培養3天，然后在16h/8h光暗交替下繼續培養，在培養的第30天在掖芽基部切口處形成愈傷組織，第50天愈傷組織分化形成叢狀新芽，第70天在新芽周圍長出新根，形成高3cm的叢狀香根草幼苗；

所述配制培養基后需要：

選取外植體：從生長健壯、無病蟲害的香根草基部剪取具4個以上莖節的莖，去除葉、葉鞘和頂芽，在莖節上下1cm處用剪刀剪斷，留下帶掖芽的莖段作為外植體；

消毒外植體：取所修剪后莖段，放入去污液中并浸泡2h，然后用流水清洗浸泡后的莖稈2h；接著在工作臺內再依次分別用75％酒精、0.1％升汞和5％的多菌靈浸沒莖段消毒0.5、6和10分鐘，最后用無菌水沖洗莖段4-6遍，于無菌濾紙上晾干后備用；

接種外植體：取消毒晾干后的莖段，在超凈工作臺內用無菌剪刀將掖芽基部0.1-0.3cm以上頂端部分剪去；用無菌解剖刀在莖節基部等距離縱切3個傷口，傷口深度0.1cm，傷口長度均為0.3cm；用無菌鑷子將去除掖芽頂端且切傷后的莖段按自然生長方向插入培養基中，扎入深度為莖節基部剛好接觸培養基上平面。

2.如權利要求1所述的利用愈傷組織繁殖香根草種苗的方法，其特征在于，所述去污液為1％洗衣粉的蒸餾水。

3.如權利要求1所述的利用愈傷組織繁殖香根草種苗的方法，其特征在于，所述組培苗培養后需要：

配制幼苗移栽培養基：營養土培養基由花土、壤土和沙按照1：1：1的比例配制，營養缽選用高度為25cm，缽底和缽口直徑不小于5cm，混勻的營養土盛裝在營養缽內，營養土培養基用量為營養缽高度的1/2，移栽前將裝有營養土培養基的營養缽放置在自來水內，使營養土飽和吸水，然后再將營養缽自然控水5小時后備用；

幼苗的分離與移栽：從培養瓶內取出叢狀香根草幼苗，去除連帶在幼苗上的培養基殘渣，用剪刀或鑷子輕輕將具有獨立根系的單個幼苗從叢狀香根草幼苗上分離出來，然后將單個幼苗移栽到裝有營養土培養基的營養缽內；

移栽苗的培養：剪取比營養缽口徑稍大的透明薄塑料布塊，并將其展開輕輕覆蓋在移栽后的營養缽口上；然后將覆蓋有塑料布的營養缽放置培養室內保濕培養7天，然后去掉塑料布繼續培養60天，幼苗即可長至10-15cm大小，培養是條件是25±1℃、16h/8h光暗交替。