[發明專利]對治療性化合物敏感性降低的乙型肝炎變異株、變異株的檢測及其用途

在審

• 申請號: 201610030881.0
• 申請日: 2009-04-03
• 公開（公告）號: CN105648110A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 陳繼明;陳立怡;黎青龍;袁孟峰
• 申請（專利權）人: 香港大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 彭昶

本申請是分案申請，原申請的申請日為2009年4月3日，申請號為 200980113181.6(PCT/CN2009/000364)，發明名稱為“對治療性化合物敏 感性降低的乙型肝炎變異株、變異株的檢測及其用途”。

相關申請的交叉引用

本申請要求保護2008年4月5日提交的美國臨時申請順序號 61/042,721的權益，該申請通過引用其整體結合到本文中。

發明背景

乙型肝炎病毒(HBV)感染是影響世界范圍大約20億人口的嚴重的 全球性健康問題。大約4億受HBV感染的人是長期攜帶者。每年約1 百萬人死于各種HBV疾病，例如慢性肝炎、肝硬化和肝細胞癌(HCC)(世 界衛生組織(WorldHealthOrganization)，2000)。這種疾病在西方國家相 對較少，主要在成人期得病。然而，該疾病在亞洲和非洲國家實際上是 流行病，其中大多數慢性HBV感染是在圍產期或兒童期獲得的。

乙型肝炎病毒(HBV)是一種約3200個堿基的小DNA病毒，具有廣 泛的序列變異性。目前已確定的有8種基因型(A～H)。

這種病毒可引起虛弱性疾病癥狀。急性感染可能導致肝衰竭，但這 種情況極少見。在出生時或在嬰兒期受到感染的人，90％以上的乙型肝 炎感染會發展成慢性形式。在25-40％患者中，慢性感染最終導致肝硬化 和肝癌。據估計，HBV引起全球30％的肝硬化和50％的HCC(Perz等， 2006)。這個沉重的負擔使得開發有效用于降低HCC風險的抗病毒療法 的需求變得十分突出(Liaw等，2004)。監測患者對這類療法的反應也因 此十分重要。

HBV主要是垂直傳播，病毒由受感染的母親傳給出生時的嬰兒。嬰 兒也可通過與受感染的父母和兄弟姐妹緊密接觸而被感染。HBV也可通 過性接觸或與受感染血液接觸而水平傳播。

該病毒通過RNA中間體復制，并利用在其復制策略中缺乏校正能 力的反轉錄。HBV基因組部分是雙鏈，在4個重疊可讀框中編碼包膜、 前核心(precore)/核心、反轉錄酶/聚合酶和X基因。

包膜蛋白抗原稱為HBsAg(乙型肝炎表面抗原)，它構成病毒的外表 層。核心蛋白抗原稱為HBcAg(乙型肝炎核心抗原)，它構成包裹HBV DNA的病毒核心。前核心蛋白抗原稱為HBeAg(乙型肝炎e抗原)，其功 能不詳。X蛋白抗原稱為HBxAg(乙型肝炎x抗原)，其確切功能也不詳。

聚合酶基因與包膜基因重疊。因此，影響聚合酶基因的催化結構域 的突變也可影響包膜蛋白的蛋白質序列，反之亦然。

慢性乙型肝炎感染的現行治療包括干擾素和核苷/核苷酸類似物。遺 憾的是，用干擾素治療有許多副作用，且只有少數患者對治療起反應。

核苷或核苷酸類似物是經化學方法改造的核苷酸，被開發用作在病 毒復制期間抑制病毒DNA合成的取代結構單元。目前已獲準(在美國) 用于慢性乙型肝炎治療的核苷和核苷酸類似物為：拉米夫定(lamivudine) (3TC或LMV)、替比夫定(telbivudine)(L-dT)、恩替卡韋(entecavir)(ETV)、 阿德福韋(adefovir)(ADV)和替諾福韋(tenofovir)。

雖然這些化合物在抑制HBVDNA合成方面已見成效，但是它們需 要長期治療，而且在長期治療中，存在出現抗藥性突變型HBV毒株的可 能。在用LMV長期治療的患者中，賦以普遍抗藥性的突變為rtM204I/V +/-rtL180M(Allen等，1998)以及其它突變。在一些患者中，在長期治療 時出現在HBVDNA聚合酶基因的B、C和D結構域上攜帶突變的抗藥 性病毒毒株。因此與LMV治療而無抗藥性病毒的患者相比，這些患者 具有較高的發生HCC的風險。

另外，在乙型肝炎e抗原(HBeAg)血清轉化的過程中，因免疫壓力 下的選擇所致出現前核心和核心啟動子突變體。這些前核心突變體意味 著會引起更嚴重的HBV感染。核心啟動子突變體，在引起前核心mRNA 轉錄和HBeAg產生降低的同時提高病毒復制，同樣與HCC的發生有關。