[發明專利]一種大鼠股骨內血管3D結構重建實驗方法

有效

• 申請號: 201610030786.0
• 申請日: 2016-01-18
• 公開（公告）號: CN105653874B
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 翁國忠
• 申請（專利權）人: 杭州越波生物科技有限公司
• 主分類號: G06T7/00
• 分類號: G06T7/00;G06T17/00
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種大鼠股骨內血管3D結構重建實驗方法，其特征在于，包括以下步驟：

1).配制造影劑：首先，分別取40ml的MV-120BLUE試劑和50ml的MV DIELUEN試劑按照4:5體積混合均勻得混合液備用；然后，在使用前20min往該混合液中加入總體積5％的(4.5ml)MV CURING AGENT試劑，再次混合攪拌均勻，得造影劑備用；

2).灌注造影劑：實驗大鼠采用0.05ml/10g濃度為10％的水合氯醛腹腔注射實施全身淺麻醉，確定所需麻醉深度后，擺好實驗大鼠手術體位為仰臥位，剪去實驗大鼠腹部區域毛發，沿左側肋弓腹膜，緊貼結扎脾門，取出脾臟放入無菌試管，放在冰水混合液中，待做細胞培養；之后，貼近胸壁，剪開胸腔，半分鐘內完成穿刺，灌注1ml生理鹽水加肝素，灌注到一半時大鼠血容量增加，右心耳隆起，將右心耳剪個小口，把血液放出；同樣的方法，第二次灌注4％甲醛，第三次灌注生理鹽水加肝素沖洗血管，直至流出液清澈；第四次灌注造影劑，直至流出乳白色液體，關閉右心耳小口，完成造影劑灌注；

3).制作標本：

a).截取：將經步驟2)處理的實驗大鼠依次分離皮膚肌肉，暴露整根后肢股骨，上至髖關節下至脛骨，分離髖關節和膝關節,得大鼠股骨備用，在操作過程中注意保護好股骨的完整性；

b).固定：將步驟a)處理的大鼠股骨放入大約其5倍體積的濃度4％的多聚甲醛溶液中，浸泡24-48h，然后取出放入70％或者75％酒精溶液中浸泡備用；

c).脫鈣：將步驟b)處理的大鼠股骨從酒精溶液中取出，放入到10％EDTA脫鈣液中，利用超聲脫鈣儀脫鈣2-3天,得脫鈣標本，并將該脫鈣標本再次放入70％或75％的酒精溶液中保存備用；

4).MicroCT掃描：將步驟3)的脫鈣標本在酒精溶液中保存0.5h后取出，采用瑞士SCANCO公司生產的型號為：uCT-100的MicroCT進行脫鈣標本整體掃描得二維圖像，設置掃描參數如下：千伏峰值：45kvp，電流值：200uA，分辨率：14.8um，曝光時間：300ms；

5).3D結構重建：運用uCT-100自帶的VMS系統、Xming和PuTTY_V0.63軟件對掃描得到的二維圖像數據進行分析，在根據股骨標本脫鈣后的軟組織和造影劑的密度不同，設置不同的閾值，從而通過程序運行實現股骨血管的3D重建，得到完整的股骨血管3D圖像，根據完整的股骨血管3D圖像利用軟件對所選取的所有成年大鼠的所有股骨標本的血管進行計算，統計分析后得出：所有成年大鼠的所有股骨標本的血管直徑的大小范圍為：14.8um-532.8um。

2.如權利要求1所述的一種大鼠股骨內血管3D結構重建實驗方法，其特征在于：所有成年大鼠為3只成年大鼠，所有成年大鼠總共的股骨標本，共6份股骨標本。

3.如權利要求1所述的一種大鼠股骨內血管3D結構重建實驗方法，其特征在于：所述的所需麻醉深度確定方法如下：用血管鉗鉗夾成年大鼠四肢，無肌肉收縮反應，無角膜反應。