[發(fā)明專利]一種侯鉤藤的分子鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610029165.0
• 申請日: 2016-01-14
• 公開（公告）號(hào): CN105506132B
• 公開（公告）日: 2019-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱爽;王業(yè)勝;曾常青;周林;李奇威
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林瑞云

1.一種侯鉤藤的分子鑒定方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.以待測樣品的總DNA為模板，利用引物ITS5和ITS4擴(kuò)增得到待測植物的rDNA ITS序列；

S2.將上述rDNA ITS序列與侯鉤藤的ITS序列進(jìn)行比對分析，找出匹配后的12位、86位、105位、120位、450位、547位或569位的堿基中的至少2個(gè)堿基進(jìn)行比對，根據(jù)比對結(jié)果鑒定待測樣品是否為侯鉤藤；

其中，步驟S2中所述結(jié)果鑒定的標(biāo)準(zhǔn)是，當(dāng)待測樣品的ITS區(qū)序列出現(xiàn)以下條件：

a.120位為A并且547位為T；

b.12位為A并且569位沒有T的插入；

c.105位為C并且86位為T；

d.105位為C并且450位為C；

當(dāng)滿足a、b、c、d至少一個(gè)條件時(shí)，判定待測樣品是侯鉤藤，當(dāng)待測樣品的ITS區(qū)序列不符合a、b、c、d中任何一個(gè)條件時(shí)，判定待測樣品不是侯鉤藤；

其中，步驟S1中所述引物ITS5的序列如SEQ ID NO.2所示，引物ITS4的序列如SEQ IDNO.3所示，所述侯鉤藤的ITS序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述侯鉤藤的分子鑒定方法，其特征在于，步驟S1所述待測樣品為茜草科鉤藤屬植物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述侯鉤藤的分子鑒定方法，其特征在于，步驟S1所述待測樣品為新鮮采集的茜草科鉤藤屬植物的葉片。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述侯鉤藤的分子鑒定方法，其特征在于，步驟S1所述待測樣品為新鮮采集的并經(jīng)硅膠快速干燥后密封保存的茜草科鉤藤屬植物的葉片。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述侯鉤藤的分子鑒定方法，其特征在于，步驟S1的具體方法是：以待測樣品的總DNA為模板，利用引物ITS5和ITS4進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物純化后連接到載體pMD18-T，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到E.coli JM109感受態(tài)細(xì)胞，進(jìn)行氨芐青霉素選擇，對陽性菌落進(jìn)行測序，測序引物同為ITS5和ITS4，得到rDNA ITS 序列。

6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述侯鉤藤的分子鑒定方法在鑒定鉤藤屬植物侯鉤藤方面的應(yīng)用。