[發明專利]一種燈籠樹組培苗高頻再生快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201610022606.4
• 申請日: 2016-01-13
• 公開（公告）號: CN105660397B
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 孫英坤;陳林敬;樊靖;胡玉春;劉華紅;田偉莉;裘雯慧;郭娟
• 申請（專利權）人: 杭州市園林綠化股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 杭州賽科專利代理事務所(普通合伙)33230
• 代理人: 尹建民

1.一種燈籠樹組培苗高頻再生快速繁殖方法，其特征在于包括以下步驟：

1)3月份選取燈籠樹性狀優良單株，將其放到溫室內養護，直至5月份，待新芽抽出后，剪取其中半木質化的嫩莖作為外植體材料，將葉片沿葉柄基部切去，嫩莖切成小段，每段有一個休眠腋芽，清洗、消毒處理后備用，將腋芽莖段的芽向上接種到啟動培養基上，啟動培養基為：wpm+0.001-0.005mg/L噻苯隆TDZ+0.005-0.01mg/L萘乙酸NAA+3％蔗糖+0.6％瓊脂，pH為5.8-6.0；

2)啟動培養一段時間以后，休眠的腋芽萌發，抽出新的幼嫩枝條，將得到的幼嫩枝條切下，接種到增殖培養基上，增殖培養10天以后，不定芽開始大量分化，15天以后，側芽開始萌動，40-50天以后，得到了大量的不定芽和側芽枝條，不定芽分化為再生小苗；所述增殖培養基的培養條件為：溫度25±2℃，光照時間為12h/d，光照強度為2000-2500Lx，濕度為60％-65％，增殖培養基為：wpm+0.01-0.05mg/L玉米素ZT+0.5-1mg/L激動素KT+0.005-0.01mg/L萘乙酸NAA+3％蔗糖+0.6％瓊脂，pH為5.8-6.0；

3)小苗培養30天以后，高度為5-8cm，切掉小苗基部的愈傷組織，接種到生根培養基上進行培養，生根培養基為：1/2wpm+0.5-1mg/L吲哚丁酸IBA+0.5-1mg/L萘乙酸NAA+0.1-0.5g/L活性炭+2％蔗糖+0.6％瓊脂，pH為5.8-6.0，所述的1/2wpm是指在wpm培養基的基礎上，大量元素減半，其他元素不變；

4)小苗生根培養一段時間后將生根的組培瓶苗轉移到煉苗坑道中的苗床上，自然環境下煉苗15-20天；

5)移栽前清洗生根苗根部的培養基，并將其插入煉苗基質進行生長。

2.如權利要求1所述的燈籠樹組培苗高頻再生快速繁殖方法，其特征在于步驟1)中時將外植體材料葉片去掉，切成帶有休眠腋芽的小段后，先用清水反復沖洗3-4次，然后配制5L0.3％的新潔爾滅消毒液，加入洗潔精混勻，再加入超聲波清洗機的清洗槽中，將沖洗過的小芽莖段均勻地分散到清洗槽中，超聲波清洗1-2小時，最后無菌水沖洗干凈，備用； 所述步驟1)中經超聲波清洗備用的小芽莖段在超凈工作臺中先用70％-75％的酒精溶液消毒60-90s，倒掉酒精后，再用1％的次氯酸鈉溶液消毒5-10min，倒掉消毒液，最后用無菌水反復沖洗4-5次。

3.如權利要求1所述的燈籠樹組培苗高頻再生快速繁殖方法，其特征在于步驟1) 中培養條件為：溫度25±2℃，光照時間為12h/d，光照強度為2000-2500Lx，濕度為60％-65％。

4.如權利要求1所述的燈籠樹組培苗高頻再生快速繁殖方法，其特征在于步驟2)中增殖培養后的再生小苗，選取其中長勢較弱的小苗，將小苗基部的愈傷組織切掉，接種到壯苗培養基上，壯苗培養條件為：溫度25±2℃，光照時間為12h/d，光照強度為2000-2500Lx，濕度為60％-65％，壯苗培養基為：wpm+0.005-0.01mg/L玉米素ZT+0.1-0.5mg/L激動素KT+0.005-0.01mg/L萘乙酸NAA+3％蔗糖+0.6％瓊脂，pH為5.8-6.0。

5.如權利要求1所述的燈籠樹組培苗高頻再生快速繁殖方法，其特征在于步驟3)中生根培養的條件為：溫度28±2℃，光照時間為8h/d，光照強度為1000-1500Lx，濕度為60％-65％。

6.如權利要求1所述的燈籠樹組培苗高頻再生快速繁殖方法，其特征在于步驟5)中移栽前3-4d，將組培瓶的瓶蓋松動，但不要完全打開，移栽前1-2d，將組培瓶的瓶蓋完全打開，并往組培瓶內灌入少量的無菌水，生根組培苗移栽前，先用鑷子將生根苗輕輕地從培養基內夾出來，將根部所帶的培養基用清水完全清洗干凈，將清洗好的生根苗輕輕插入煉苗基質，煉苗基質為珍珠巖：泥炭＝1:1，v/v。

7.一種燈籠樹組培苗高頻再生快速繁殖方法的增殖培養基，其特征在于由以下成分組成：wpm+0.01-0.05mg/L玉米素ZT+0.5-1mg/L激動素KT+0.005-0.01mg/L萘乙酸NAA+3％蔗糖+0.6％瓊脂，pH為5.8-6.0。