[發(fā)明專利]一種DNA類樣本保存稀釋液及其制備

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610021730.9
• 申請日: 2016-01-01
• 公開（公告）號: CN105524916A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李爾華;高旭年;鐘鳳然;吳淑賢
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州邦德盛生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

所屬領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制品技術(shù)領(lǐng)域，屬于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)領(lǐng)域核糖核酸(DNA) 類樣本的稀釋和保存范疇，涉及DNA類樣本稀釋液的制備方法及其應(yīng)用。

發(fā)明背景

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)是重要的分子生物學(xué)技術(shù)，對現(xiàn)代分子生物學(xué)的發(fā)展起到非 常重要的作用。PCR技術(shù)特點是高靈敏度、高特異性、省時快速，直接檢測目的基因的樣本 分為DNA類樣本或RNA類樣本，但是對樣本的稀釋和保存要求甚高。核糖核酸(縮寫為RNA， 即RibonucleicAcid)，存在于生物細(xì)胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。RNA由核 糖核苷酸經(jīng)磷酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和堿基構(gòu)成。RNA 的堿基主要有4種，即A腺嘌呤、G鳥嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶，其中，U(尿嘧啶)取代了 DNA中的T。DNA的質(zhì)量好壞和濃度高低直接影響著檢測結(jié)果，DNA酶是DNA降解的主 要原因，DNA酶是一類生物活性非常穩(wěn)定的酶，除細(xì)胞內(nèi)DNA酶外，環(huán)境中的灰塵、各種 實驗器皿和試劑、人類皮膚的汗液、唾液中均存在DNA酶，且DNA酶耐熱、耐酸堿，蛋白 變性劑可使之暫時失活，但變性劑去除后，又可恢復(fù)活性。所以在DNA提取過程中必須避 免外源性DNA酶的污染和抑制內(nèi)源性DNA酶的活性。DNA易受外界物理因素：溫度、濕度； 化學(xué)因素：pH值、水解反應(yīng)、氧化反應(yīng)；生物因素：酶解及微生物侵染等作用等因素而降解

在現(xiàn)有的DNA類樣本稀釋保存方法中，主要方法有：1)稀釋液用DEPC水、DNAsin等； 2)保存主要用液氮或低溫保存。其缺點是：1)不同類型的DNA類樣本(血清、血漿、組織、 尿液、分泌物、培養(yǎng)液等)無法用同一種緩沖液或稀釋液；2)各種緩沖液或稀釋液保存的效 果質(zhì)量差，DNA容易降解；3)保存后的樣本要快速進入液氮或低溫保存，室溫保存時間過短。 因此，開發(fā)一種高效防止DNA降解且能適用不同DNA類樣本的稀釋保存液，具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種DNA類樣本稀釋保存液的制備方法。可作為臨床不同類型的 DNA類樣本(血清、血漿、組織、尿液、分泌物、培養(yǎng)液等)的樣本稀釋或/和保存。

本發(fā)明的DNA類樣本稀釋保存液制備方法如下：

1、量取若干毫升去離子純化水；

2、分別加入二甲基亞砜(1％～3％[v/v])、山梨醇(0.5mol/L～1mol/L)、Tris-HCl (0.01mol/L～0.05mol/L)，乙二胺四乙酸(0.01mol/L～0.05mol/L)，Triton-100(0.1％～0.5％[v/v])， NP-40(0.1％～0.5％[v/v])、Chelex-100(1％～5％[w/v])、疊氮鈉(0.08％～0.1％[w/v])，鏈 霉素(400U/ml～800U/ml)；

3、調(diào)pH值至7.8～8.2后定容；

4、密封后高壓滅菌，室溫備用。

本發(fā)明為一種可直接使用的樣品保存液，其原理是抑制DNase活性，可有效保護新鮮樣 本里的DNA免受降解。具有穩(wěn)定、易保存、便捷等優(yōu)點。適用于血清、血漿、組織、尿液、 分泌物等DNA類樣本的保存和稀釋。浸入DNA類樣本稀釋保存液后，新鮮組織細(xì)胞中DNA可 以完好的在37℃下保存1周，在25℃下保存1個月，4℃下保存6個月，在-20℃或-80℃下長期保 存。

附圖說明

圖1顯示對照組PCR擴增檢測圖

圖2顯示實驗組PCR擴增檢測圖

圖3顯示37℃環(huán)境中普通稀釋液稀釋的樣本(P2)PCR擴增檢測圖

圖4顯示37℃環(huán)境中普通稀釋液稀釋的樣本(P1)PCR擴增檢測圖

圖5顯示37℃環(huán)境中RNA類樣本稀釋保存液稀釋的樣本(P2)PCR擴增檢測圖

圖6顯示37℃環(huán)境中RNA類樣本稀釋保存液稀釋的樣本(P1)PCR擴增檢測圖

圖7顯示室溫環(huán)境中普通稀釋液稀釋的樣本(P2)PCR擴增檢測圖

圖8顯示室溫環(huán)境中普通稀釋液稀釋的樣本(P1)PCR擴增檢測圖

圖9顯示室溫環(huán)境中RNA類樣本稀釋保存液稀釋的樣本(P2)PCR擴增檢測圖

圖10顯示室溫環(huán)境中RNA類樣本稀釋保存液稀釋的樣本(P1)PCR擴增檢測圖

圖11顯示2-8℃環(huán)境中普通稀釋液稀釋的樣本(P2)PCR擴增檢測圖