[發明專利]一種國槐子葉體細胞胚誘導的快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201610017808.X
• 申請日: 2016-01-12
• 公開（公告）號: CN105638472B
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發明（設計）人: 龐彩紅;李雙云;孫超;王因花;毛秀紅;劉盛芳;王學文;夏陽
• 申請（專利權）人: 山東省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 曹麗

1.一種誘導國槐子葉體細胞胚的快速繁殖方法，其特征是：包括以下步驟：

(1)將國槐子葉接種在體細胞胚誘導培養基上培養形成愈傷組織，所述體細胞胚誘導培養基為：A+3.0～5.0mg/L 2,4-D+0.5～1.0mg/L BA+0.5～1.0mg/L NAA+0.1～0.5mg/LTDZ+0.5～1.0mg/L谷氨酰胺+0.5～1.0mg/L CH+5.0g/L瓊脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；

(2)將上述愈傷組織轉接到不定芽誘導培養基上，培養形成叢生芽小苗，所述不定芽誘導培養基為:A+0.1～0.5mg/L BA+0.1～0.5mg/L NAA+0.5～1.0mg/L谷氨酰胺+0.5～1.0mg/L CH+5.0g/L瓊脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；

(3)將叢生芽小苗切成愈傷塊轉接到試管苗增殖培養基上進行增殖快繁培養，所述試管苗增殖培養基配方:改良的MS+1.0～2.0mg/L BA+1.0～2.0mg/LIBA+5.0g/L瓊脂+30g/L蔗糖,pH值5.8～6.0；

(4)將增殖培養的叢生芽從基部切開，轉入壯苗培養基中，進行壯苗培養，所述壯苗培養基為：改良的MS+5.0g/L瓊脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；

(5)將壯苗培養后的小苗切成單株轉接到生根培養基上培養后，即可煉苗移栽，所述生根培養基為：1/2改良的MS+0.1～0.5mg/L IBA+0～0.05mg/L NAA+5.0g/L瓊脂+20g/L蔗糖,pH值5.8～6.0，所述1/2改良的MS是改良的MS全量減半；

(6)煉苗移栽；煉苗移栽的具體步驟為：將試管苗封口膜綁繩松開，在培養室適應1～2d，轉入遮光度50％的溫室中，去掉封口膜，煉苗2～3d，待小苗葉片上的氣孔自主開合后，用鑷子輕輕將小苗夾出，清水洗去基部殘留的培養基，移栽到裝有混合育苗基質的花盆中，保持相對濕度在80％以上；

所述改良的MS包括MS常量營養元素、MS微量營養元素和改良的MS有機試劑；

上述各步驟中A的配方是MS常量營養元素、MS微量營養元素和改良的B5有機試劑；

所述MS常量營養元素的組分和其對應的濃度如下：硝酸鉀1900mg/L，硝酸銨1650mg/L，七水硫酸鎂370mg/L，無水磷酸二氫鉀170mg/L，二水氯化鈣440mg/L，乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L，七水硫酸亞鐵27.8mg/L；

所述MS微量營養元素的組分和其對應的濃度如下：四水硫酸錳22.3mg/L，硫酸鋅8.6mg/L，硼酸6.2mg/L，碘化鉀0.83mg/L，鉬酸鈉0.25mg/L，硫酸銅0.025mg/L，氯化鈷0.025mg/L；

所述改良的MS有機試劑的組分和其對應的濃度如下：甘氨酸20mg/L，鹽酸硫胺素10mg/L，煙酸1.0mg/L，鹽酸吡哆醇1.0mg/L，肌醇100mg/L；

所述A的配方中改良的B5有機試劑的組分和其對應的濃度如下：鹽酸硫胺素100mg/L，煙酸10mg/L，鹽酸吡哆醇10mg/L，肌醇1000mg/L。

2.如權利要求1所述的快速繁殖方法，其特征是：所述國槐子葉的采集方法：選取當年生國槐種子，去除果莢，清洗干凈后準備消毒；將國槐種子消毒后，用手術刀片和鑷子輕輕剝去種皮，將子葉取出，用手術刀劃3～4個傷口。

3.如權利要求1所述的快速繁殖方法，其特征是：所述各步驟中培養條件除特殊說明外，均為培養室溫度白天25±2℃，夜晚18±2℃，光照強度1000～1500lx，光照時間16h/d。

4.如權利要求2所述的快速繁殖方法，其特征是：所述消毒為：于超凈工作臺上，用體積分數為70％酒精浸泡30～60s，無菌水沖洗2～3次，再用質量分數為0.1％升汞溶液消毒8～12min，然后用無菌水沖洗4～6次。