[發明專利]用于制備基于乳的蛋白質水解產物的方法

在審

• 申請號: 201610014090.9
• 申請日: 2010-03-31
• 公開（公告）號: CN105661553A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: P.R.奧斯特加德;S.厄恩斯特;G.B.林格萊夫
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: A23L33/18
• 分類號: A23L33/18;A23L33/19;C12N9/52;C12N9/58;C12N9/64;C12N9/76
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 史悅

本發明申請是基于申請日為2010年3月31日、申請號為“201080014596.0” (國際申請號為PCT/EP2010/054290)，名稱為“用于制備基于乳的蛋白質水解 產物的方法”的發明專利申請的分案申請。

關于序列表

本申請包括計算機可讀形式的序列表。通過述及將該計算機可讀形式收 入本文。

發明領域

本發明涉及一種用于制備基于乳的蛋白質水解產物的酶促方法及此類 水解產物的用途，例如在嬰兒配方組合物中。

發明背景

已經開發了嬰兒配方，其容許取代母乳喂養嬰兒。

此類嬰兒配方應當完全滿足嬰兒的營養要求，直到引入適宜的補充喂食。 另外，味道是重要的，因為至少家長更喜歡沒有苦味的嬰兒配方。代替普通 牛奶，包含水解的乳蛋白質(例如部分水解的乳清蛋白質或廣泛水解的酪蛋白) 的嬰兒配方常常用作此類配方，變應原性較低且仍具有可接受的味道。

文獻中記載的用于制備部分水解產物的方法常常包括使用胰酶，諸如通 過對豬胰組織的提取生產的胰蛋白酶制備物(參見例如WO9304593A1， US5039532A)。記載的一些方法包括使用胰蛋白酶和糜蛋白酶的混合物。例 如EP0353122A披露了一種使用胰蛋白酶和糜蛋白酶的混合物來制備低變應 原性乳清蛋白質水解產物的方法，其中糜蛋白酶/胰蛋白酶活性的比例為 1.5-3.0。在EP0631731A1中，以USP單位計，具有1.3至18、更優選4至6的胰 蛋白酶對糜蛋白酶比例的胰蛋白酶和糜蛋白酶混合物據說通常產生具有期 望特性的水解產物。

出于幾個原因，使用自微生物生成的蛋白水解酶可賦予益處。例如，自微 生物生產酶高效且易于控制。因此，可大量地且高純度地生產此類酶。還有， 使用微生物酶會有助于克服在自動物來源提取酶方面與QA升高有關的困難。

本發明的發明人的一個目標是開發一種用由微生物生成的酶來制備如 下的基于乳的蛋白質水解產物的方法，該基于乳的蛋白質水解產物具有低變 應原性。另一個目標是開發一種用由微生物生成的酶來制備如下的基于乳的 蛋白質水解產物的方法，該基于乳的蛋白質水解產物具有與用包含胰蛋白酶 和糜蛋白酶的提取制備物制備的水解產物的蛋白質片段譜相似的蛋白質片 段譜。另一個目標是開發一種用由微生物生成的酶來制備如下的基于乳的蛋 白質水解產物的方法，該基于乳的蛋白質水解產物具有可接受的味道。特別 地，非常希望獲得如下的部分乳清蛋白質水解產物，其具有低變應原性，具 有與用包含胰蛋白酶和糜蛋白酶的提取制備物制備的水解產物的蛋白質片 段譜相似的蛋白質片段譜，和/或具有可接受的味道，特別是在苦味方面。

發明概述

本發明的發明人令人驚訝地發現由微生物生成的酶可用于生產基于乳 的蛋白質水解產物，例如供包括在嬰兒配方中。

因此，本發明涉及一種用于制備基于乳的蛋白質水解產物的方法，其包 括用a)自微生物生成的胰蛋白酶樣內肽酶和b)至少一種自微生物生成的其它 內肽酶處理基于乳的蛋白質材料(proteinaceousmaterial)的溶液。

具體地，本發明涉及如下各項：

1.一種用于制備基于乳的蛋白質水解產物的方法，其包括用a)自微生物 生成的胰蛋白酶樣內肽酶和b)至少一種自微生物生成的其它內肽酶處理基 于乳的蛋白質材料的溶液。

2.依照項1的方法，其中該胰蛋白酶樣內肽酶源自鐮孢屬(Fusarium)的 菌株。

3.依照前述項任一項的方法，其中該胰蛋白酶樣內肽酶選自下組：

i)包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列與SEQIDNO:2、4或6任一 的成熟多肽具有至少60％同一性；

ii)由多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸在至少低嚴格條件下與下述 雜交：(i)SEQIDNO:1、3或5任一的成熟多肽編碼序列，(ii)包含SEQIDNO: 1、3或5任一的成熟多肽編碼序列的基因組DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全長 互補鏈；

iii)由多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸包含與SEQIDNO:1、3或5 任一的成熟多肽編碼序列具有至少60％同一性的核苷酸序列；和

iv)SEQIDNO:2、4或6任一的成熟多肽的包含一個或多個(幾個)氨基酸 的取代、缺失、和/或插入的變體。