[發明專利]一種荸薺多糖的提取方法

有效

• 申請號: 201610013268.8
• 申請日: 2016-01-06
• 公開（公告）號: CN105524183B
• 公開（公告）日: 2017-08-01
• 發明（設計）人: 王穎;曾霞;張玲;余梅;韋明肯;鄧紅梅;程水明;歐陽樂軍
• 申請（專利權）人: 廣東石油化工學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P39/06;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙)11369
• 代理人: 史霞

技術領域

本發明涉及一種植物多糖的提取方法。更具體地說，本發明涉及一種荸薺多糖的提取方法。

背景技術

荸薺(Eleochairistoberosa)，又名馬蹄(Water chestnut)，地栗、烏芋、通天草等，屬莎草科荸薺屬，是多年生淺水草本植物。在中國長江流域以南各省均有栽培。荸薺以其地下球莖為食用器官，是一種藥食兼用的果蔬類食品。其肉質細嫩，營養豐富，汁多味甜，清脆爽口，在南方自古有“地下雪梨”之美譽，北方則稱其為“江南人參”。

研究發現馬蹄內含有的活性成分包括黃酮類、多酚類、多糖類、甾醇類和馬蹄英等。荸薺多糖具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、免疫調節等功能與人工合成的抗氧化劑相比，荸薺多糖具有安全性高、來源廣等特點，在食品、化妝品和醫藥等領域顯示出廣闊的應用前景。目前荸薺多糖提取方法甚多，每種方法都各有利弊，選擇合適的荸薺多糖提取方法可滿足不同的需要。

發明內容

本發明的一個目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說明的優點。

本發明還有一個目的是提供一種荸薺多糖的提取方法，其采用酶解法與超聲波相結合的提取工藝，具有反應條件溫和、時間短、試劑消耗少等優點，適于工業化大生產。

為了實現根據本發明的這些目的和其它優點，提供了一種荸薺多糖的提取方法，包括以下步驟：

步驟一，一次提取，稱取荸薺粉100g，按料液重量比1：20-40加入蒸餾水，在60-70℃下進行超聲波提取，超聲時間為20-30min，超聲功率為600w；

步驟二，二次提取，將步驟一制得的溶液降至室溫，然后加入纖維素酶進行二次提取，其中酶解溫度為40-48℃，酶解時間為35-45min，酶用量為150-180U/g；

步驟三，脫脂，將步驟二制得的溶液加入94％乙醇脫脂，沉淀靜置過夜后離心取上清液；

步驟四，將步驟三制得的上清液用旋轉蒸發儀濃縮，濃縮液中加入無水乙醇，使乙醇濃度達到80％，搖勻，靜止沉淀30min；傾倒去上清得沉淀，沉淀用蒸餾水復溶，得到糖液；將制得的糖液,用體積比為25∶5∶1的糖液:氯仿:正丁醇進行萃取,棄去中間層的變性蛋白及下層的有機液，萃取5次，得到去蛋白糖溶液；將去蛋白糖液濃縮,濃縮液先放冰箱中冷凍,再放置真空冷凍干燥，得到荸薺粗多糖；

步驟五，利用DEAE-52纖維素柱層析和Sephadex G-25凝膠柱層析進行荸薺多糖的純化制得荸薺多糖。

優選的是，所述步驟一中，超聲波提取的所述料液重量比為1：40，超聲溫度為62℃，超聲時間為21min，超聲功率為600w。

優選的是，所述步驟二中，酶解溫度40℃，酶解時間42min，纖維素酶用量174U/g，pH值為6.0。

優選的是，所述荸薺多糖的提取方法還包括：所述荸薺粉的制備，具體為選取飽滿無病斑的荸薺洗干凈、去皮、蒸餾水清洗2遍，切片、60℃烘干、粉碎過60目篩。

優選的是，所述步驟三中，離心的轉速為5000r/min，時間為15min。

優選的是，所述步驟五中，所述DEAE-52纖維素柱層析具體包括：

a，溶液配制

0.5％HCL溶液：準確量取20.85ml鹽酸，用蒸餾水定容至500ml；

0.5％NaOH溶液：準確稱取10g NaOH，用蒸餾水溶解定容至500ml，移到塑料瓶中備用；

Tris-HCL溶液：準確稱取Tris 2.422g溶于適量的蒸餾水中，用濃鹽酸溶液調節pH值至7.4，再用蒸餾水定容至1000mL；

不同NaCL濃度的系列Tris-HCL洗脫液：分別稱取0.5852g，1.7556g，2.926g，4.0964g，5.852g NaCL，用Tris-HCL溶液溶解定容到100ml，即得0.1、0.3、0.5以及1.0mol/L NaCl洗脫液；

b，DEAE-纖維素的處理：稱量15g DEAE-52陰離子交換劑干粉，用蒸餾水浸泡，去除雜質；再用0.5mol/L的HCL溶液浸泡1h，再用蒸餾水洗至pH值中性，并在抽濾漏斗中將其抽干；再用0.5mol/L的NaOH溶液將抽干的離子交換劑浸泡1h，再用蒸餾水將其洗至中性，抽干，浸泡于pH7.4 20mmol/L Tris-HCL緩沖液中；

c，裝柱:將活化后的DEAE-cellulose 52離子交換填料裝填柱型為2.8cm×50cm層，柱床高度為25cm；

d，平衡:用Tris-HCl液以2.5mL/min流速平衡柱床1個柱床體積；