[發明專利]一種治療乳腺癌的CAR-T細胞制劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201610002321.4
• 申請日: 2016-01-06
• 公開（公告）號: CN105640990A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 周萱
• 申請（專利權）人: 奧思達干細胞有限公司
• 主分類號: A61K35/17
• 分類號: A61K35/17;A61P35/00;C12N15/867
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種治療乳腺癌的CAR-T細胞制劑及其制備 方法。

背景技術

在腫瘤免疫治療方法中，過繼性免疫效應細胞治療因具有眾多的優點而受到人們 的重視。嵌合抗原受體（ChimericAntigenRecepTor，CAR）修飾T細胞（CAR-T）作為過繼免 疫細胞治療的新領域更是成為研究熱點。癌癥病人因放、化療導致的免疫系統功能低下，是 導致病情復發的重要原因，也是困擾醫學界的一大難題。CAR-T細胞療法則是一種全新的生 物免疫治療方法，通過提取患者體內T淋巴細胞，經過體外10至14天的培養改造，通過載體 整合進入到正常T細胞基因序列，形成嵌合抗原受體T細胞（CAR-T）。被重新編碼的T細胞就 能獲得特異性識別和攻擊殺傷腫瘤細胞的能力，能精確殺傷腫瘤細胞，但又不會傷及正常 細胞。由于是誘導、激活自體細胞，因此該療法沒有通常放、化療的毒副反應，也沒有傳統治 療中出現的耐藥性。

CAR-T細胞是由單克隆抗體的單鏈可變區和T細胞信號傳導區連接而成，抗體與 相應的腫瘤抗原結合后能以主要組織相容性復合體以非限制性方式使T細胞活化，進而發 揮抗腫瘤效應。CAR的結構分為：胞外抗原結合區、鉸鏈區、跨膜區和胞內信號區。目標抗原 的選擇對于CAR的特異性、有效性以及基因改造T細胞自身的安全性來講都是關鍵的決定因 素。胞外抗原結合區：通常由針對腫瘤相關抗原的單克隆抗體的輕鏈及重鏈連接而成。鉸鏈 區：對于遠離細胞膜的抗原表位，無鉸鏈區的CAR-T細胞可以識別和結合抗原；而對于膜近 端的抗原表位，一個靈活的鉸鏈區對抗原的識別是必要的。因此針對不同腫瘤相關抗原需 要調整鉸鏈區長度，以更好發揮靶向結合能力。跨膜區：來自CD3、CD28、CD8的跨膜區常用來 構建CAR，并在CAR的二聚化和T細胞活化中發揮重要作用。胞內信號區：由共刺激分子如 CD28、CD134和CD137組成，其中CD28可募集PI3K、Grb2等分子來調節關鍵轉錄因子的活性； CD134能促進T細胞體外增殖且增加白介素-2的分泌；CD137是腫瘤壞死因子家族受體，能激 活下游的JNK，p38，MAPK和NF-κB信號途徑。大多數研究者把CD28或CD137的協同共刺激信號 分子融合到CD3結構域的上游。根據胞內信號傳導區域的組成不同可分為3代CAR-T細胞。第 1代CAR-T細胞的胞內部分僅含CD3ζ結構域，雖然能誘導T細胞的激活和最初的細胞毒性反 應，但是存活時間短且只有很低或者沒有白介素-2的產生；第2代CAR-T細胞將共刺激分子 如CD28、CD137的胞內部分融合到CD3結構域的上游，效果比第1代明顯增強因而應用最廣 泛；第3代CAR-T細胞則同時融合2種共刺激分子到CD3結構域的上游，其抗腫瘤活性與第2代 CAR-T細胞相比尚無定論。CAR-T細胞在血液腫瘤的免疫治療中起到了重要作用，以CD19- CAR-T細胞治療淋巴細胞腫瘤最為突出，有些已經進入Ⅱ期臨床試驗。CAR-T細胞在實體腫 瘤中的研究大部分仍處于動物實驗階段，但有一些小樣本的臨床試驗和病例報道取得了不 錯的療效。

乳腺癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤之一，隨著我國人口城市化的加速，乳腺 癌發生率及病死率有逐年上升的趨勢。乳腺癌的常規治療方法主要有：手術治療、化學治 療、放射治療、內分泌治療。近年來綜合治療提高了乳腺癌的治療效果，但仍有相當一部分 患者復發或對常規治療耐藥。因此找到一種新的治療方法以降低乳腺癌患者的復發和提高 治療效果，具有特別重要的臨床意義。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種治療乳腺癌的CAR-T細胞制劑及其制備方 法，對干乳腺癌的治療具有特別重要的臨床意義。

為實現上述技術目的，達到上述技術效果，本發明通過以下技術方案實現：

一種治療乳腺癌的CAR-T細胞制劑是由嵌合了靶細胞抗原受體的CAR-T細胞、人血白蛋 白、IL-6受體拮抗藥物Tocilizumab、生理鹽水按一定比例配制而成。

進一步的，所述細胞注射液的具體組成為：CAR-T的濃度為（4～6）×10⁷個/ml，質 量體積比為2%的人血白蛋白、8mg/mLIL-6受體拮抗藥物Tocilizumab，余量為生理鹽水。