[發(fā)明專利]用于鑒定和富集包含位點特異性基因組修飾的細胞的方法和組合物有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201580070582.3 | 申請日： | 2015-12-18 |
| 公開（公告）號： | CN107109427B | 公開（公告）日： | 2021-06-18 |
| 發(fā)明（設計）人： | 陳鐘穎;金明局;鐘衡;辜唯寧;蔣亞平;闕求登;M-D·奇爾頓 | 申請（專利權）人： | 先正達參股股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;C12N15/10;C12N5/10;A01H5/00;A01H6/46;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 中國貿(mào)促會專利商標事務所有限公司 11038 | 代理人： | 傅宇昌 |
| 地址： | 瑞士*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 鑒定 富集 包含 特異性 基因組 修飾 細胞 方法 組合 | ||
1.一種將轉(zhuǎn)基因整合到玉蜀黍基因組中的基因組核酸酶切割位點的方法，該方法包括將以下各項引入玉蜀黍細胞中：
a)包括至少100個連續(xù)核苷酸并且進一步包括轉(zhuǎn)基因的第一核酸分子，其中所述至少100個連續(xù)核苷酸具有在從包括下列各項的組中選擇的核苷酸序列中的靶位點：SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67；以及
b)包括編碼核酸酶的核苷酸序列的第二核酸分子，該核酸酶用于在與對應于(a)的至少100個連續(xù)核苷酸的從包括下列各項的組中選擇的核苷酸序列相鄰的基因組核酸酶切割位點處定點切割：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67，
該引入在這樣的條件下進行，即該第二核酸分子的表達可以發(fā)生以產(chǎn)生核酸酶并且該核酸酶可以在基因組核酸酶切割位點處切割核苷酸序列，由此轉(zhuǎn)基因被整合到玉蜀黍基因組中的基因組核酸酶靶切割位點處。
2.如權利要求1所述的方法，其中該基因組核酸酶切割位點位于染色體1上的染色體區(qū)間內(nèi)，該染色體區(qū)間由以下定義并且包括以下：如由玉蜀黍B73 RefGen_V2定義的堿基對(bp)位置38,860,000至堿基對(bp)位置39,015,000。
3.如權利要求1-2中任一項所述的方法，其中該第一核酸分子和該第二核酸分子通過基因槍核酸遞送被引入到玉蜀黍細胞中。
4.如權利要求1-2中任一項所述的方法，其中該第一核酸分子和該第二核酸分子經(jīng)由農(nóng)桿菌被引入到玉蜀黍細胞中。
5.如權利要求1-2中任一項所述的方法，其中該第一核酸分子和該第二核酸分子存在于單個核酸構建體上。
6.如權利要求1-2中任一項所述的方法，其中該第一核酸分子和該第二核酸分子存在于單獨的核酸構建體上。
7.如權利要求1-2中任一項所述的方法，其中該第一核酸分子和/或該第二核酸分子在玉蜀黍細胞中瞬時表達。
8.一種產(chǎn)生玉蜀黍植物或植物部分或其子代的方法，該玉蜀黍植物或植物部分或其子代包括整合到玉蜀黍基因組中的基因組核酸酶切割位點中的轉(zhuǎn)基因，該方法包括從通過如權利要求1所述的方法產(chǎn)生的玉蜀黍細胞再生玉蜀黍植物。
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