[發(fā)明專(zhuān)利]用于多元RNA引導(dǎo)的基因組編輯和其它RNA技術(shù)的方法和組合物有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201580069186.9 | 申請(qǐng)日： | 2015-10-16 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN107027313B | 公開(kāi)（公告）日： | 2021-09-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | Y·楊;K·謝 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 賓州研究基金會(huì) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N15/82 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N15/82 |
| 代理公司： | 永新專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 72002 | 代理人： | 左路;區(qū)斌 |
| 地址： | 美國(guó)賓夕*** | 國(guó)省代碼： | 暫無(wú)信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 多元 rna 引導(dǎo) 基因組 編輯 其它 技術(shù) 方法 組合 | ||
1.用于在受體細(xì)胞中產(chǎn)生多元RNA介導(dǎo)的遺傳操縱的方法，其包括：
獲得多核苷酸構(gòu)建體，其編碼兩個(gè)或更多個(gè)與一或多個(gè)tRNA前體序列串聯(lián)排列的引導(dǎo)RNA序列，和
在CRISPR-相關(guān)核酸酶存在下將所述構(gòu)建體引入所述細(xì)胞，從而所述受體細(xì)胞的tRNA加工系統(tǒng)在所述tRNA前體序列處切割從轉(zhuǎn)錄的多核苷酸產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄物以釋放所述引導(dǎo)RNA序列。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述引導(dǎo)RNA序列在所述受體細(xì)胞中靶向單一基因內(nèi)的多個(gè)位點(diǎn)。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述引導(dǎo)RNA序列靶向包括多個(gè)不同的基因。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述RNA介導(dǎo)的遺傳操縱是RNA引導(dǎo)的基因組編輯，其包括靶向突變、依賴同源性的修復(fù)、轉(zhuǎn)錄激活和抑制、表觀基因組編輯、和/或基因組標(biāo)記。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述tRNA前體序列包括pretRNA受體莖、D-環(huán)臂和TΨC-環(huán)臂。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述tRNA前體序列被RNase P和/或RNase Z和/或RNase E中的一或多個(gè)識(shí)別和切割。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述tRNA前體序列是SEQ ID NO:13、188或189。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述引導(dǎo)RNA包括間隔區(qū)RNA和支架RNA序列。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述構(gòu)建體包括tRNA前體-引導(dǎo)RNA-tRNA前體-引導(dǎo)RNA。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述受體細(xì)胞是植物細(xì)胞。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述受體細(xì)胞是動(dòng)物細(xì)胞。
12.權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞是微生物細(xì)胞。
13.權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞是人類(lèi)細(xì)胞。
14.用于在受體細(xì)胞中的多元RNA介導(dǎo)的基因組操縱的核酸構(gòu)建體，其包含：兩個(gè)或更多個(gè)與tRNA前體序列串聯(lián)排列的引導(dǎo)RNA序列。
15.權(quán)利要求14的核酸構(gòu)建體，其中所述兩個(gè)或更多個(gè)引導(dǎo)RNA序列在所述受體細(xì)胞中靶向單一基因內(nèi)的多個(gè)位點(diǎn)。
16.權(quán)利要求14的核酸構(gòu)建體，其中所述引導(dǎo)RNA序列靶向多個(gè)不同的基因或DNA元件。
17.權(quán)利要求14的核酸構(gòu)建體，其中所述tRNA前體序列包括pretRNA受體莖、D-環(huán)臂和TΨC-環(huán)臂。
18.權(quán)利要求14的核酸構(gòu)建體，其中所述tRNA前體序列被RNase P和/或RNase Z和/或RNase E中的一或多個(gè)識(shí)別和切割。
19.權(quán)利要求14的核酸構(gòu)建體，其中所述tRNA前體序列是SEQ ID NO:13、188或189。
20.權(quán)利要求14的核酸構(gòu)建體，其中所述引導(dǎo)RNA包括間隔區(qū)RNA和支架RNA序列。
21.權(quán)利要求14的核酸構(gòu)建體，其中所述構(gòu)建體包括tRNA前體-引導(dǎo)RNA-tRNA前體-引導(dǎo)RNA。
22.權(quán)利要求14的核酸構(gòu)建體，其還包含用于所述核酸在所述受體細(xì)胞中表達(dá)的調(diào)節(jié)元件。
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