[發明專利]與胎兒絨毛外滋養層細胞測定有關的方法和組合物

有效

• 申請號: 201580066610.4
• 申請日: 2015-10-12
• 公開（公告）號: CN107109699B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: D·R·阿爾曼特;S·德魯羅
• 申請（專利權）人: 韋恩州立大學
• 主分類號: C40B30/04
• 分類號: C40B30/04;G01N33/68
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;陳玉平

根據本公開內容的方面，分離和測定胎兒絨毛外滋養層細胞——包括測定胎兒絨毛外滋養層細胞的RNA——的方法包括：從妊娠受試者獲得含有胎兒絨毛外滋養層細胞的母體子宮頸內樣品；將所述母體子宮頸內樣品在醛固定劑中固定；從所述母體子宮頸內樣品中移除胎兒絨毛外滋養層細胞，從而產生經分離的胎兒絨毛外滋養層細胞；從所述胎兒絨毛外滋養層細胞分離并測定RNA。

相關申請的引用

本申請要求于2014年10月10日提交的美國臨時專利申請序列號62/062,433的優先權，所述臨時專利申請的全部內容以引用的方式納入本文。

技術領域

本公開內容總體上涉及經分離的胎兒絨毛外滋養層細胞以及遺傳變異和病理狀況的產前檢測和診斷的測定方法。根據本公開內容的具體方面，本文記載了分離和測定來自妊娠中胎兒的胎兒絨毛外滋養層細胞的RNA的方法，以及來自妊娠中胎兒的胎兒絨毛外滋養層細胞的蛋白的質譜測定方法。

背景技術

遺傳變異和病理狀況的產前檢測和診斷適用于監測并維持母親和胎兒的健康和幸福。缺少無創性方法用于獲得并測定通常數量較少的胎兒細胞。持續需要這樣的測定，其向臨床醫生警示妊娠中的異常狀況，例如唐氏綜合征和其他染色體數目疾病、遺傳病的診斷以及將發展先兆子癇或子宮內生長受限的妊娠中的胎兒的病理狀況。

發明內容

根據本發明的方面，測定來自胎兒絨毛外滋養層細胞的RNA的方法包括：從妊娠受試者獲得母體子宮頸內樣品；從所述母體子宮頸內樣品中移除胎兒絨毛外滋養層細胞；通過用醛固定劑處理來固定胎兒絨毛外滋養層細胞，產生醛固定的胎兒絨毛外滋養層細胞；清洗所述醛固定的胎兒絨毛外滋養層細胞以促使除去由醛固定劑引入的交聯，產生經清洗的胎兒絨毛外滋養層細胞；從所述經清洗的胎兒絨毛外滋養層細胞中提取胎兒絨毛外滋養層細胞RNA；以及測定所述胎兒絨毛外滋養層細胞RNA以確定所述胎兒絨毛外滋養層細胞RNA的一個或更多個特征。

根據本發明的方面，測定來自胎兒絨毛外滋養層細胞的RNA的方法包括：從妊娠受試者獲得母體子宮頸內樣品；從所述母體子宮頸內樣品中移除胎兒絨毛外滋養層細胞，產生經分離的胎兒絨毛外滋養層細胞；通過用醛固定劑處理來固定經分離的胎兒絨毛外滋養層細胞，產生醛固定的經分離的胎兒絨毛外滋養層細胞；裂解所述醛固定的經分離的胎兒絨毛外滋養層細胞，產生裂解物；清洗所述裂解物以促使除去由醛固定劑引入的交聯，產生經清洗的裂解物；從所述經清洗的裂解物中提取胎兒絨毛外滋養層細胞RNA；以及測定所述胎兒絨毛外滋養層細胞RNA以確定所述胎兒絨毛外滋養層細胞RNA的一個或更多個特征。

根據本發明的方面，測定來自胎兒絨毛外滋養層細胞的RNA的方法包括：從妊娠受試者獲得母體子宮頸內樣品；從所述母體子宮頸內樣品中移除胎兒絨毛外滋養層細胞；通過用醛固定劑處理來固定胎兒絨毛外滋養層細胞，產生醛固定的胎兒絨毛外滋養層細胞，其中所述用醛固定劑處理在從母體子宮頸內樣品中移除胎兒絨毛外滋養層細胞之前和/或之后進行；清洗所述醛固定的胎兒絨毛外滋養層細胞以促使除去由醛固定劑引入的交聯，產生經清洗的胎兒絨毛外滋養層細胞；從所述經清洗的胎兒絨毛外滋養層細胞中提取胎兒絨毛外滋養層細胞RNA；以及測定所述胎兒絨毛外滋養層細胞RNA以確定所述胎兒絨毛外滋養層細胞RNA的一個或更多個特征。

根據本發明的方面，測定來自胎兒絨毛外滋養層細胞的RNA的方法包括：從妊娠受試者獲得母體子宮頸內樣品；從所述母體子宮頸內樣品中移除胎兒絨毛外滋養層細胞，產生經分離的胎兒絨毛外滋養層細胞；通過用醛固定劑處理來固定胎兒絨毛外滋養層細胞，產生醛固定的胎兒絨毛外滋養層細胞，其中所述用醛固定劑處理在從母體子宮頸內樣品中移除胎兒絨毛外滋養層細胞之前和/或之后進行；在醛固定之后裂解經分離的胎兒絨毛外滋養層細胞，產生裂解物，清洗所述裂解物以促使除去由醛固定劑引入的交聯，產生經清洗的裂解物；從所述經清洗的裂解物中提取胎兒絨毛外滋養層細胞RNA；以及測定所述胎兒絨毛外滋養層細胞RNA以確定所述胎兒絨毛外滋養層細胞RNA的一個或更多個特征。