[發明專利]用于檢測含有mecC的甲氧西林抗性的金黃色葡萄球菌的組合物和方法

有效

• 申請號: 201580064617.2
• 申請日: 2015-12-01
• 公開（公告）號: CN107002142B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: J.A.約翰遜;A.海斯
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6816;C12Q1/14;C12N15/11
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權陸軍;黃希貴

1.一種檢測樣品中含有mecC的金黃色葡萄球菌(mecC-MRSA)的方法，所述方法包括：

- 執行擴增步驟，所述擴增步驟包括使所述樣品與和orfX基因的一部分雜交的寡核苷酸引物和mecC-MRSA寡核苷酸引物接觸，如果mecC-MRSA存在于所述樣品中，則產生擴增產物；

- 執行雜交步驟，所述雜交步驟包括使所述擴增產物與可檢測的mecC-MRSA寡核苷酸探針接觸；和

- 檢測所述擴增產物的存在或不存在，其中所述擴增產物的存在指示mecC-MRSA在所述樣品中的存在，且其中所述擴增產物的不存在指示mecC-MRSA在所述樣品中的不存在；

其中所述mecC-MRSA寡核苷酸引物由選自SEQ ID NO: 1、2、3、6和8的序列組成；

其中與orfX基因的一部分雜交的所述寡核苷酸引物由SEQ ID NO: 9的序列組成；并且

其中所述可檢測的mecC-MRSA寡核苷酸探針由SEQ ID NO: 10的序列或其互補物組成。

2.根據權利要求1的方法，其中：

- 所述雜交步驟包括：使所述擴增產物與探針接觸，所述探針用供體熒光部分和對應的受體熒光部分標記；且

- 所述檢測步驟包括：檢測探針的供體熒光部分和受體熒光部分之間的熒光共振能量轉移(FRET)的存在或不存在，其中所述熒光的存在或不存在指示mecC-MRSA在所述樣品中的存在或不存在。

3.根據權利要求1或2中任一項的方法，其中所述擴增采用具有5'至3' 核酸酶活性的聚合酶。

4.根據權利要求2的方法，其中所述供體熒光部分和對應的受體熒光部分在探針上彼此不超過8個核苷酸。

5.根據權利要求2或4中任一項的方法，其中所述受體熒光部分是猝滅劑。

6.根據權利要求1-2或4中任一項的方法，其中所述與orfX基因的一部分雜交的寡核苷酸引物和所述mecC-MRSA寡核苷酸引物具有40個或更少的核苷酸。

7.一種用于檢測含有mecC的金黃色葡萄球菌(mecC-MRSA)的核酸的試劑盒，所述試劑盒包括：

- 第一寡核苷酸引物，其由選自SEQ ID NO: 1、2、3、6和8的序列組成；

- 第二寡核苷酸引物，其被構造成與orfX基因的一部分雜交并且由SEQ ID NO: 9的序列組成；和

- 可檢測地標記的寡核苷酸探針，其被構造成與由所述第一寡核苷酸引物和所述第二寡核苷酸引物產生的擴增子雜交并且由SEQ ID NO: 10的序列或其互補物組成。

8.根據權利要求7的試劑盒，其中所述可檢測地標記的寡核苷酸探針包含供體熒光部分和對應的受體熒光部分。

9.根據權利要求8的試劑盒，其中所述受體熒光部分是猝滅劑。

10.根據權利要求7-9中任一項的試劑盒，所述試劑盒還包含核苷三磷酸、核酸聚合酶和所述核酸聚合酶的功能所必需的緩沖液。

11.根據權利要求7-9中任一項的試劑盒，其中所述第一寡核苷酸引物和所述第二寡核苷酸引物和/或所述寡核苷酸探針具有40個或更少的核苷酸。