[發(fā)明專利]上調癌干細胞標志物以產生抗原特異性細胞毒性效應T細胞的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201580059884.0
• 申請日: 2015-09-04
• 公開（公告）號: CN107148470A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發(fā)明（設計）人: 王朔;吳春曉;曾潔銘;Y·I·普爾瓦提;邱錦標
• 申請（專利權）人: 新加坡科技研究局
• 主分類號: C12N5/0784
• 分類號: C12N5/0784;C12N5/095;A61K35/15;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司11270
• 代理人: 景鵬,姚開麗

1.一種組合物，其包含通過與至少一種結腸直腸癌干細胞或其碎片接觸而被脈沖的至少一種分離的免疫系統(tǒng)細胞，其中所述結腸直腸癌干細胞通過使至少一種分化的結腸直腸瘤細胞逆轉以具有未分化的結腸直腸干細胞狀態(tài)來獲得。

2.根據權利要求1所述的組合物，其中所述分離的免疫系統(tǒng)細胞是抗原呈遞細胞。

3.根據權利要求2所述的組合物，其中所述抗原呈遞細胞是成熟樹突細胞。

4.根據權利要求3所述的組合物，其中所述成熟樹突細胞從已通過與所述至少一種結腸直腸癌干細胞或其碎片接觸而被脈沖的未成熟樹突細胞衍生。

5.根據權利要求4所述的組合物，其中所述成熟樹突細胞具有上調的CD83、CD40和CD86表達。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的組合物，其中所述結腸直腸癌干細胞是通過在體外使至少一種分化的腫瘤細胞逆轉至未分化的結腸直腸干細胞狀態(tài)獲得的體外(試管)結腸直腸干細胞。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的組合物，其中所述結腸直腸癌干細胞是經熱激的結腸直腸癌干細胞或其碎片。

8.根據權利要求7所述的組合物，其中所述碎片是經熱激結腸直腸癌干細胞的裂解物。

9.根據權利要求1至8中任一項所述的組合物，其中所述結腸直腸癌干細胞是表達能夠在體外使分化的結腸直腸瘤細胞逆轉或重編程為未分化的結腸直腸癌干細胞狀態(tài)的轉錄因子的未分化結腸直腸癌干細胞。

10.根據權利要求1至9中任一項所述的組合物，其中所述未分化結腸直腸癌干細胞通過用能夠使分化的結腸直腸瘤細胞逆轉或重編程為未分化的結腸直腸癌干細胞的轉錄因子重編程所述分化的結腸直腸瘤細胞來獲得。

11.根據權利要求1至10中任一項所述的組合物，其中所述結腸直腸癌干細胞通過用選自Oct4和Sox2的細胞編程因子或轉錄因子逆轉或重編程所述分化的結腸直腸瘤細胞來獲得。

12.一種用于刺激對象的免疫系統(tǒng)的組合物，其包含通過與從結腸直腸癌干細胞獲得的一種或更多種抗原接觸而被脈沖的至少一種抗原呈遞細胞，其中所述結腸直腸癌干細胞通過使至少一種分化的結腸直腸瘤細胞逆轉以具有未分化的結腸直腸干細胞狀態(tài)來獲得，其中所述逆轉通過用選自Oct4和Sox2的細胞重編程因子或轉錄因子重編程從所述對象獲得的所述分化結腸直腸瘤細胞來實現。

13.根據權利要求12所述的組合物，其中所述抗原呈遞細胞和所述結腸直腸瘤細胞二者從同一或不同對象獲得。

14.根據權利要求11至13中任一項所述的組合物，其中使用桿狀病毒載體來將所述細胞重編程因子或轉錄因子遞送到所述結腸直腸瘤細胞中，所述桿狀病毒載體包含鋅指核酸酶編碼序列以及含有所述細胞重編程因子或轉錄因子的融合基因。

15.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所述未分化結腸直腸干細胞狀態(tài)以下列至少一項為特征：

(a)上皮特征喪失且E-鈣粘蛋白表達降低，

(b)獲得間充質特性且波形蛋白(VIM)、纖連蛋白(FN1)、玻連蛋白(VTN)、N-鈣粘蛋白(CDH2)、snail(SNAI1)、twist(TWIST1)、鋅指E盒結合同源框1(ZEB1)、轉化生長因子β1(TGFB1)、slug(SNAI2)和SOX4差異表達；以及

(c)表達選自由以下組成的組的癌干細胞標志物：CD24、CS133、CD144、CD166、醛脫氫酶1(ALDH1A1)、含有富亮氨酸重復序列的G蛋白偶聯(lián)受體5(LGR5)、二肽基肽酶4(DPP4)、連環(huán)蛋白β-1(CTNNB1)、ATP結合盒亞家族G成員5(ABCG5)和整聯(lián)蛋白β-1(ITGB1)。

16.一種用于脈沖樹突細胞使得所述樹突細胞能夠誘導細胞毒性T淋巴細胞針對體外結腸直腸癌干細胞的特異性免疫應答的組合物，所述組合物包含已從經重編程的體外結腸直腸癌細胞富集的至少一種體外結腸直腸癌干細胞樣細胞或其碎片。

17.根據權利要求16所述的組合物，其中所述特異性免疫應答的所述誘導包括將來源于所述體外結腸直腸癌干細胞的抗原呈遞至T細胞群以及誘導所述T細胞群分化成所述細胞毒性T淋巴細胞，其中所述細胞毒性T淋巴細胞對所述抗原具有特異性。