[發(fā)明專利]含氧萜烯的生產(chǎn)方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201580057470.4 | 申請日： | 2015-08-21 |
| 公開（公告）號： | CN107002109A | 公開（公告）日： | 2017-08-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 阿吉庫瑪·帕拉伊爾·庫馬蘭;林敬堯;李立偉;蘇維克·高希;克里斯多夫·皮里;安東尼·庫阿利 | 申請（專利權(quán)）人： | 馬努斯生物合成股份有限公司 |
| 主分類號： | C12P19/34 | 分類號： | C12P19/34;C12N9/00 |
| 代理公司： | 北京泛誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11298 | 代理人： | 楊本良,文琦 |
| 地址： | 美國馬*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 含氧萜烯 生產(chǎn) 方法 | ||
1.一種制備倍半萜烯的含氧產(chǎn)物的方法，其包括使倍半萜烯與具有倍半萜烯氧化活性的甜菊貝殼杉烯氧化酶(SrKO)或其衍生物接觸，以及回收所述含氧產(chǎn)物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述SrKO衍生物包含相對于SrKO(SEQ ID NO:37、38或55)具有1-50個獨立選自替換、缺失或插入的突變的氨基酸序列。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述SrKO衍生物包含相對于SrKO(SEQ ID NO:37、38或55)具有1-40個突變的氨基酸序列。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述SrKO衍生物包含與SrKO(SEQ ID NO:37、38或55)具有至少70％序列同一性的氨基酸序列，并且具有朱欒倍半萜氧化酶活性。
5.如權(quán)利要求2-4中任一項所述的方法，其中相對于SrKO(SEQ ID NO:37、38或55)的一個或多個突變選自表2或表6。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中至少2個突變選自表2和/或表6。
7.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述SrKO是缺失其N端跨膜區(qū)的至少一部分且添加來自大腸桿菌yhcB或其衍生物的內(nèi)膜跨膜結(jié)構(gòu)域的衍生物。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述SrKO是缺失其N端跨膜結(jié)構(gòu)域的15-35個氨基酸且添加來自大腸桿菌yhcB或其衍生物的跨膜結(jié)構(gòu)域的15-25個氨基酸的衍生物。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中來自yhcB的所述N端跨膜結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列或相對于SEQ ID NO:118具有1-5個氨基酸突變的氨基酸序列。
10.如權(quán)利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述SrKO是相對于SEQ ID NO:37在選自46、76、94、131、231、284、383、390、400、444、468、488和499的位置具有一個或多個突變的衍生物。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述SrKO是相對于SEQ ID NO:37具有選自R76K、M94V、T131Q、F231L、H284Q、R383K、I390L、T468I和T499N的一個或多個突變的衍生物。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述SrKO是包含選自SEQ ID NO:55-61、104和105的氨基酸序列或相對于選自SEQ ID NO:55-61、104和105的序列具有1-20個突變的氨基酸序列的衍生物。
13.如權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述倍半萜烯是朱欒倍半萜、大根香葉烯(A、B、C、D或E)、法尼烯、法尼醇、諾特卡醇、廣藿香醇、杜松烯、雪松醇、蛇麻烯、長葉烯和/或佛手柑油烯、β-衣蘭烯、β-檀香醇、β-檀香烯、α-檀香烯、α-檀香醇、β-香根酮、a-香根酮、客烯醇、紅沒藥烯、β-丁香烯、長葉烯；α-甜橙醛；α-紅沒藥醇、(-)-β-可巴烯、(-)-α-可巴烯、4(Z),7(Z)-癸二烯醛、雪松醇、雪松烯、雪松醇、愈創(chuàng)木醇、(-)-6,9-愈創(chuàng)木二烯、布藜醇、愈創(chuàng)木醇、喇叭烯、喇叭茶醇、香樟烯和α-佛手柑油烯。
14.如權(quán)利要求1-13所述的方法，其中主要的倍半萜烯是朱欒倍半萜、大根香葉烯(A、B、C、D或E)、法尼烯、法尼醇、諾特卡醇、廣藿香醇、杜松烯、雪松醇、蛇麻烯、長葉烯和/或佛手柑油烯、β-衣蘭烯、β-檀香醇、β-檀香烯、α-檀香烯、α-檀香醇、β-香根酮、a-香根酮、客烯醇、紅沒藥烯、β-丁香烯、長葉烯；α-甜橙醛；α-紅沒藥醇、(-)-β-可巴烯、(-)-α-可巴烯、4(Z),7(Z)-癸二烯醛、雪松醇、雪松烯、雪松醇、愈創(chuàng)木醇、(-)-6,9-愈創(chuàng)木二烯、布藜醇、愈創(chuàng)木醇、喇叭烯、喇叭茶醇、香樟烯和α-佛手柑油烯。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述主要的倍半萜烯是朱欒倍半萜。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中主要的含氧產(chǎn)物是諾卡酮和任選地諾特卡醇。
17.如權(quán)利要求1-16中任一項所述的方法，其中所述接觸發(fā)生在宿主細胞中，所述宿主細胞是細菌。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述宿主細胞是大腸桿菌、枯草芽孢桿菌或惡臭假單胞菌。
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