[發(fā)明專利]具有增強的碳水化合物的高強度酸性Α-葡糖苷酶

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580052512.5
• 申請日: 2015-09-30
• 公開（公告）號: CN107075468B
• 公開（公告）日: 2021-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 拉塞爾·戈喬爾;H·杜
• 申請（專利權(quán)）人: 阿米庫斯治療學(xué)公司
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;C12N5/10
• 代理公司: 北京律誠同業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006
• 代理人: 徐金國;吳啟超

1.一種包含由中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞產(chǎn)生的重組人α葡糖苷酶(rhGAA)的組合物，其中所述CHO細(xì)胞表達(dá)如SEQ ID NO:4所示的rhGAA，其為該rhGAA的一種110kDa前體形式；其中該rhGAA上的40％至60％的N-聚糖是復(fù)合型N-聚糖；并且該rhGAA包含3.0-5.0mol M6P殘基/mol rhGAA。

2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中90％至100％的rhGAA結(jié)合至陽離子非依賴性甘露糖-6-磷酸受體(CIMPR)。

3.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物中rhGAA上的45％至55％的N-聚糖是復(fù)合型N-聚糖。

4.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述rhGAA包含3.0至4.0mol M6P/mol rhGAA。

5.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述rhGAA包含4.0至5.0mol M6P/mol rhGAA。

6.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述rhGAA包含至少4mol唾液酸殘基/mol rhGAA。

7.如權(quán)利要求1所述的組合物，每個rhGAA包含至少一個雙磷酸化的N-聚糖。

8.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中該rhGAA包含2.0至8.0mol唾液酸殘基/molrhGAA。

9.如權(quán)利要求1所述的組合物，進一步包括一種藥理分子伴侶。

10.一種用于制造如權(quán)利要求1所述的組合物的方法，該方法包括培養(yǎng)產(chǎn)生該rhGAA的CHO細(xì)胞系并從CHO細(xì)胞培養(yǎng)物中回收所述rhGAA。

11.一種產(chǎn)生如權(quán)利要求1所述的組合物的CHO細(xì)胞系。

12.一種制造如權(quán)利要求11所述的CHO細(xì)胞系的方法，該方法包括用編碼rhGAA的DNA轉(zhuǎn)化CHO細(xì)胞，選擇將編碼rhGAA的DNA穩(wěn)定整合到其一個或多個染色體中并穩(wěn)定表達(dá)rhGAA的CHO細(xì)胞，并且選擇表達(dá)rhGAA的CHO細(xì)胞，該rhGAA具有高含量的帶有單-M6P或雙-M6P的聚糖，并且任選地選擇具有高唾液酸含量的N-聚糖并且和/或具有含低非磷酸化的高-甘露糖含量的N-聚糖的CHO細(xì)胞。

13.權(quán)利要求1所述的組合物在制備用于治療有需要的受試者的與溶酶體rhGAA不足相關(guān)的病癥、障礙或疾病的藥物中的用途。

14.如權(quán)利要求13所述的用途，其中該受試者患有糖原貯積癥II型(龐貝氏病)。

15.如權(quán)利要求13所述的用途，其中所述藥物是給予至該受試者的心肌。

16.如權(quán)利要求13所述的用途，其中所述藥物是給予至該受試者的四頭肌、三頭肌或其他骨骼肌。

17.如權(quán)利要求13所述的用途，其中所述藥物是給予至該受試者的膈肌。

18.如權(quán)利要求13所述的用途，其中所述藥物進一步包括一種藥理分子伴侶，或其中所述藥物與藥理分子伴侶共同給予或分開給予。

19.如權(quán)利要求18所述的用途，其中所述藥理分子伴侶是AT2220或其藥學(xué)上可接受的鹽。

20.如權(quán)利要求18所述的用途，其中所述藥理分子伴侶是AT2221或其藥學(xué)上可接受的鹽。