[發明專利]灌注培養方法及其用途

在審

• 申請號: 201580042017.6
• 申請日: 2015-06-05
• 公開（公告）號: CN106795495A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: A·維利格-奧伯貝克;J·楊;Y·楊;G·羅恩佐
• 申請（專利權）人: 建新公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12M3/02
• 代理公司: 北京市嘉元知識產權代理事務所(特殊普通合伙)11484
• 代理人: 張永新

1.一種培養哺乳動物細胞的方法，所述方法包括：

提供包含至少一個孔的多孔板，所述孔包含置于第一液體培養基中的哺乳動物細胞，其中所述第一液體培養基占據約5％至約70％的孔體積；

在約31℃至約40℃并以約320轉每分鐘(RPM)至約500RPM旋轉攪拌，將所述多孔板溫育一段時間；和

在所述時間段過程中，連續地或周期性地去除第一體積的第一液體培養基，并向所述第一液體培養基添加第二體積的第二液體培養基，其中所述第一和第二體積大致相等。

2.權利要求1的方法，其中所述哺乳動物細胞是中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。

3.權利要求2的方法，其中所述CHO細胞含有編碼重組蛋白的核酸。

4.權利要求3的方法，其中所述重組蛋白是免疫球蛋白、酶、生長因子、蛋白片段或工程化蛋白。

5.一種產生重組蛋白的方法，該方法包括：

提供包含至少一個孔的多孔板，所述孔包含置于第一液體培養基中的哺乳動物細胞，其中所述第一液體培養基占據約5％至約70％的孔體積，并且所述哺乳動物細胞含有編碼重組蛋白的核酸；

在約31℃至約40℃并以約320轉每分鐘(RPM)至約500RPM旋轉攪拌，將所述多孔板溫育一段時間；

在所述時間段過程中，連續地或周期性地去除第一體積的第一液體培養基并向所述第一液體培養基添加第二體積的第二液體培養基，其中所述第一和第二體積大致相等；和

從所述哺乳動物細胞或從所述第一或第二培養基回收所述重組蛋白。

6.權利要求5的方法，其中所述重組蛋白回收自所述哺乳動物細胞。

7.權利要求6的方法，其中所述重組蛋白是免疫球蛋白、酶、生長因子、蛋白片段或工程化蛋白。

8.權利要求5的方法，其中所述重組蛋白回收自所述第一或第二液體培養基。

9.權利要求8的方法，其中所述重組蛋白是分泌的免疫球蛋白、分泌的酶、分泌的生長因子、分泌的蛋白片段或分泌的工程化蛋白。

10.一種用于測試用于制備重組蛋白的制造工藝的方法，所述方法包括：

提供包含至少一個孔的多孔板，所述孔包含置于第一液體培養基中的哺乳動物細胞，其中所述第一液體培養基占據約5％至約70％的孔體積，并且所述哺乳動物細胞含有編碼重組蛋白的核酸；

在約31℃至約40℃并伴隨約320轉每分鐘(RPM)至約500RPM旋轉攪拌，將所述多孔板溫育一段時間；

在所述時間段過程中，連續地或周期性地去除第一體積的第一液體培養基并向所述第一液體培養基添加第二體積的第二液體培養基，其中所述第一和第二體積大致相等；

檢測所述哺乳動物細胞中或所述第一或第二液體培養基中的重組蛋白；和

將所述哺乳動物細胞中或所述第一或第二液體培養基中存在的重組蛋白的量與重組蛋白的參考水平進行比較。

11.權利要求10的方法，其中所述重組蛋白的參考水平是使用不同的培養方法產生的重組蛋白的水平。

12.權利要求11的方法，其中所述不同的培養方法利用不同的第一或第二液體培養基、不同的哺乳動物細胞、不同的溫度、不同的攪拌水平或不同的多孔板。

13.權利要求11的方法，其中所述不同的培養方法利用不同的原材料、抗結塊劑或化學上限定的液體培養基。

14.權利要求10的方法，其中所述方法用于實施高通量細胞培養實驗來執行實驗設計(design-of-experiment；DOE)或質量源于設計(quality-by-design；QBD)研究。

15.權利要求10的方法，其中在所述第一或第二液體培養基中檢測所述重組蛋白。

16.權利要求15的方法，其中所述重組蛋白是分泌的免疫球蛋白、分泌的酶、分泌的生長因子、分泌的蛋白片段或分泌的工程化蛋白。

17.權利要求10的方法，其中在所述細胞中檢測所述重組蛋白。

18.權利要求17的方法，其中所述重組蛋白是免疫球蛋白、酶、生長因子、蛋白片段或工程化蛋白。