[發(fā)明專利]基因表達(dá)系統(tǒng)

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580038806.2
• 申請(qǐng)日: 2015-06-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107075529A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 瑪莎·考克多;盧克·阿爾菲;西蒙·華納
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 奧西泰克有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;A01K67/033
• 代理公司: 北京華睿卓成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11436
• 代理人: 程淼

1.包括第一和第二基因表達(dá)系統(tǒng)的多核苷酸序列，其中：

i)所述第一基因表達(dá)系統(tǒng)包括組分：可操作地連接至第一啟動(dòng)子的第一顯性致死基因、編碼第一轉(zhuǎn)錄激活因子的基因、以及第一剪接控制序列，

ii)所述第二基因表達(dá)系統(tǒng)包括組分：可操作地連接至第二啟動(dòng)子的第二顯性致死基因、編碼第二轉(zhuǎn)錄激活因子的基因、以及第二剪接控制序列，

其中

所述轉(zhuǎn)錄激活因子中的每一個(gè)能夠激活至少一個(gè)所述啟動(dòng)子，條件是當(dāng)兩個(gè)所述轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)時(shí)兩個(gè)所述啟動(dòng)子都被激活，

所述第一和第二剪接控制序列中的每一個(gè)通過(guò)可變剪接分別介導(dǎo)所述第一和第二顯性致死基因的雌性特異表達(dá)，

所述第一和第二轉(zhuǎn)錄激活因子中的每一個(gè)的反式激活活性分別被第一和第二外源控制因子阻遏，其中所述第一外源控制因子與所述第二外源控制因子相同或不同，以及

所述第一基因表達(dá)系統(tǒng)的所述組分中的每一個(gè)與所述第二基因表達(dá)系統(tǒng)的所述組分相同或不同。

2.如權(quán)利要求1所述的多核苷酸序列，其中所述第一轉(zhuǎn)錄激活因子為所述第一顯性致死基因的基因產(chǎn)物和/或所述第二轉(zhuǎn)錄激活因子為所述第二顯性致死基因的基因產(chǎn)物，以使得所述轉(zhuǎn)錄因子還提供所述顯性致死基因賦予的致死效應(yīng)。

3.如權(quán)利要求1或2所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二剪接控制序列中的一個(gè)或兩個(gè)連同剪接體通過(guò)介導(dǎo)各自的顯性致死基因的RNA轉(zhuǎn)錄本的剪接而產(chǎn)生編碼功能性蛋白的mRNA和至少一種編碼非功能性蛋白的mRNA，來(lái)介導(dǎo)各自的顯性致死基因的雌性特異表達(dá)，其中所述編碼功能性蛋白的mRNA是在雌性中產(chǎn)生。

4.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二啟動(dòng)子中的每一個(gè)在能夠激活所述啟動(dòng)子的所述轉(zhuǎn)錄激活因子不存在時(shí)基本上無(wú)活性。

5.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二致死基因中的一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地為tTA或tTAV基因變體，優(yōu)選TAV基因變體。

6.如權(quán)利要求5所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二顯性致死基因中的一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地為tTAV(SEQ ID NO:26)、tTAV2(SEQ ID NO:27)和tTAV3(SEQ ID NO:28)之一。

7.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二剪接控制序列中的一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地源自tra內(nèi)含子、dsx基因或Actin-4基因，優(yōu)選tra內(nèi)含子。

8.如權(quán)利要求7所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二剪接控制序列中的一個(gè)或兩個(gè)源自實(shí)蠅科，優(yōu)選源自蠟實(shí)蠅屬、果實(shí)蠅屬、實(shí)蠅屬和繞實(shí)蠅屬之一。

9.如權(quán)利要求8所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二剪接控制序列中的一個(gè)或兩個(gè)源自地中海實(shí)蠅。

10.如權(quán)利要求8所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二剪接控制序列中的一個(gè)源自地中海實(shí)蠅，另一個(gè)剪接控制序列源自不同的物種。

11.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二基因表達(dá)系統(tǒng)中的一個(gè)或兩個(gè)還包括與各自的啟動(dòng)子關(guān)聯(lián)的增強(qiáng)子，所述轉(zhuǎn)錄激活因子中的至少一個(gè)在各自的增強(qiáng)子處起作用。

12.如權(quán)利要求11所述的多核苷酸序列，其中所述增強(qiáng)子，或所述增強(qiáng)子中的一個(gè)或兩個(gè)，為包括一個(gè)或多個(gè)tetO重復(fù)序列的tetO元件。

13.如權(quán)利要求12所述的多核苷酸序列，其中所述或每個(gè)增強(qiáng)子獨(dú)立地為tetOx7、tetOx14或tetOx21。

14.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二啟動(dòng)子中的一個(gè)或兩個(gè)在至少胚胎發(fā)育期間表達(dá)。

15.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二啟動(dòng)子中的一個(gè)或兩個(gè)為最小啟動(dòng)子。

16.如權(quán)利要求14或15所述的多核苷酸序列，其中所述第一和第二啟動(dòng)子中的每一個(gè)獨(dú)立地為Hsp70或sryα，優(yōu)選其中一個(gè)為Hsp70，另一個(gè)為sryα。